目的:探討AEG-1在LPS誘發(fā)的牙髓炎中的作用及相關(guān)機(jī)制。方法:為探討在牙髓炎癥中是否有AEG-1的參與,在LPS誘發(fā)的SD大鼠牙髓炎模型中,通過免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)牙髓炎中AEG-1的表達(dá)情況;同時(shí),收集15-25歲臨床患者的健康正畸牙或智齒,對(duì)其進(jìn)行牙髓細(xì)胞的原代培養(yǎng),通過RT-qPCR及Western blot檢測(cè)在不同作用時(shí)長(zhǎng)和不同濃度LPS刺激后的牙髓細(xì)胞中,AEG-1的表達(dá)情況。為了檢測(cè)AEG-1在牙髓炎中的可能作用,通過轉(zhuǎn)染特定的siRNA進(jìn)入牙髓細(xì)胞以敲減細(xì)胞中AEG-1的表達(dá)水平,使用RT-qPCR(逆轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR)檢測(cè)在LPS刺激后的敲減了 AEG-1的牙髓細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá)情況。采用Western blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)NF-kB信號(hào)通路中轉(zhuǎn)錄因子p65在LPS刺激的敲減了 AEG-1的牙髓細(xì)胞中的入核情況。采用Western blot檢測(cè)在使用NF-kB和PI3K信號(hào)通路阻斷劑后,LPS誘發(fā)的牙髓細(xì)胞中AEG-1的表達(dá)情況。結(jié)果:AEG-1在LPS誘發(fā)的大鼠牙髓炎模型中表達(dá)增加。同時(shí),RT-qPCR及Western blot結(jié)果顯示,AEG-1在LPS刺激的牙髓細(xì)胞中表達(dá)顯著升高,具有濃度依賴性(P0.05)。同時(shí)Western blot顯示LPS刺激1h后牙髓細(xì)胞中AEG-1表達(dá)量最高。使用特定siRNA敲減牙髓細(xì)胞中的AEG-1表達(dá)后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示牙髓細(xì)胞中因LPS刺激導(dǎo)致的炎癥因子,包括IL-1β,IL-6及TNF-α的誘發(fā)性表達(dá)升高情況被部分抑制,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí),Western blot和細(xì)胞免疫熒光結(jié)果證實(shí)AEG-1的敲減導(dǎo)致LPS誘發(fā)的牙髓細(xì)胞中NF-kB信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子p65的入核量減少。Western blot顯示使用NF-kB和PI3K信號(hào)通路阻斷劑可下調(diào)因LPS刺激而在牙髓細(xì)胞中表達(dá)升高的AEG-1。結(jié)論:AEG-1可通過NF-kB信號(hào)通路的活化影響LPS刺激下牙髓細(xì)胞中炎癥因子如IL-1β,IL-6及TNF-α的表達(dá)。NF-kB和PI3K信號(hào)通路均參與牙髓細(xì)胞中因LPS刺激而導(dǎo)致的AEG-1的表達(dá)升高。
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R781.31
【部分圖文】：

圖１：邋ＡＥＧ－ｌ／ＭＴＤＨ可通過多種信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。致癌基因Ｈａ＿ｒａｓ可通過激活逡逑ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信號(hào)通路增加ＡＥＧ－１／ＭＤＴＨ的表達(dá)，隨后ＡＥＧ－１引起ＧＳＫ－３Ｐ的磷酸化致其失活，逡逑增強(qiáng)ｃ－Ｍｙｃ的穩(wěn)定性并結(jié)合至ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１的啟動(dòng)子區(qū)域。ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１可通過激活ＡＫＴ、逡逑ＮＦ－ｋＢ及Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)通路來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和侵襲。激活ＮＦ－ｋＢ是部分通逡逑過ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１與ｐ６５、ＣＢＰ的直接接觸獲得的。ＡＥＧ－１／ＭＴＤＨ還可通過增強(qiáng)ＭＡＰＫ激酶逡逑ＥＲＫ、ｐ３８來激活Ｗｎｔ／（３－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)通路，亦可通過磷酸化ＧＳＫ３ｐ穩(wěn)定卩－ｃａｔｅｎｉｎ或直接促進(jìn)逡逑ＬＥＦ－１邋的表達(dá)來激活Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)通路。（Ｈｕ邋ｅｔ邋ａｌ．邋２００９）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１：邋ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１邋ｐｒｏｍｏｔｅｓ邋ｔｕｍｏｒ邋ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ邋ｔｈｒｏｕｇｈ邋ｔｈｅ邋ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ逡逑ｍｕｌｔｉｐｌｅ邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ邋ｐａｔｈｗａｙｓ．邋Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ邋Ｈａ－Ｒａｓ邋ｉｎｃｒｅａｓｅｓ邋ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑ｔｈｒｏｕｇｈ邋ｔｈｅ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ邋ｐａｔｈｗａｙ，ｗｈｉｃｈ邋ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｓ邋ａｎｄ邋ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓ逡逑ＧＳＫ３Ｐ，ａｎｄ邋ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ邋ｅｎｈａｎｃｅｓ邋ｔｈｅ邋ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｂｉｎｄｉｎｇ邋ｏｆ邋ｃ－Ｍｙｃ邋ｔｏ邋ｔｈｅ逡逑ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１邋ｐｒｏｍｏｔｅｒ．邋ＭＴＤＨ／ＡＥＧ－１邋ｃａｎ邋ａｃｔｉｖａｔｅ邋ＡＫＴ

：圖示為可與ＡＥＧ－ｌ／ＭＤＴＨ／ＬＹＲＩＣ相互作用的多種蛋白分子。ＮＬＳ：邋ｔｆ定位信號(hào)；逡逑：跨膜區(qū)。（Ｅｍｄａｄ，Ｄａｓ２０１３）逡逑ｒｅ邋２：邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ＡＥＧ－ｌ／ＭＴＤＨ／ＬＹＲＩＣ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｒｅｇｉｏｎ邋ｔｈａｔ逡逑ａｃｔｓ邋ｗｉｔｈ邋ｖａｒｉｏｕｓ邋ｐｒｏｔｅｉｎｓ．邋ＮＬＳ，邋ｎｕｃｌｅａｒ邋ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ邋ｓｉｇｎａｌ；邋ＴＭＤ，逡逑ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｄｏｍａｉｎ．逡逑Ｆ－ｋＢ邋和邋ＣＢＰ逡逑ＡＥＧ－１通過激活ＮＦ－ｋＢ信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)ＡＥＧ－１介導(dǎo)的腫瘤組織的轉(zhuǎn)移、侵襲、逡逑定型腫瘤生長(zhǎng)，也可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中炎性因子的表達(dá)。ＡＥＧ－１可通過與逡逑Ｂ信號(hào)通路中的轉(zhuǎn)錄因子ｐ６５相互作用增強(qiáng)ＮＦ－ｋＢ信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)逡逑ａｄ，Ｓａｒｋａｒ２００６）。ＮＦ－ｋＢ信號(hào)的激活需要轉(zhuǎn)錄共激活蛋白，如組蛋白乙�；义厦福ǎ龋粒裕﹣砘罨＃龋粒钥赏ㄟ^募集轉(zhuǎn)錄因子和ＲＮＡ聚合酶ＩＩ到目的基因的逡逑子區(qū)域，來調(diào)節(jié)染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)。研究顯示，ＮＦ－ｋＢ可以與包括ＣＢＰ、ｐ３００及逡逑關(guān)因子等幾類ＨＡＴ相互作用（Ｃｈｅｎ邋ｅｔ邋ａｌ．邋２００３）。在此相互作用中，ＨＡＴ使組蛋逡逑

圖３：邋ＡＥＧ－１在ＳＤ大鼠牙髓炎中的表達(dá)。除對(duì)照組外，在大鼠下頜第一磨牙咬逡逑合面打開髓腔，注入ＬＰＳ并用玻璃離子充填，觀察在ＬＰＳ作用后牙￥髓細(xì)胞中逡逑ＡＥＧ－１的表達(dá)情況。（ａ－ｅ）分別為對(duì)照組，開髓ＬＰＳ處理一天、三天、五天、七逡逑天組。圖中可見，ＬＰＳ造成冠部牙髓壞死，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)，可見ＡＥＧ－１逡逑在對(duì)照組中表達(dá)量較少，隨著ＬＰＳ作用時(shí)間的延長(zhǎng)，ＡＥＧ－１表達(dá)量在牙髓組織逡逑中逐漸增加。（ｆ）對(duì)五組中胞核中ＡＥＧ－１陽性的細(xì)胞進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，顯示ＡＥＧ－１逡逑在ＬＰＳ刺激后表達(dá)逐漸上升，第五夭達(dá)到峰值后逐漸降低。與對(duì)照組相比＊尸＜逡逑０．０５，邐＊＊尸＜０．０１，邋＊＊＊尸＜０．００１。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋ＡＥＧ－１邋ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｄ邋ｉｎ邋ｒａｔ邋ｍｏｄｅｌｓ邋ｏｆ邋ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｄｅｎｔａｌ邋ｐｕｌｐｉｔｉｓ，邋（ａ－ｅ）逡逑Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｉｍａｇｅｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＡＥＧ－１邋ｉｎ邋ｎｏｒｍａｌ邋ａｎｄ逡逑ｉｎｆｌａｍｅｄ邋ｐｕｌｐ，邋（ｆ）邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＡＥＧ－１－ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｐｅｒｆｏｒａｔｉｏｎ邋ａｒｅａ逡逑ｐｅｒ邋ｈｉｇｈ－ｐｏｗｅｒ邋ｆｉｅｌｄ邋（ｈｐｆ）邋ｏｎ邋ｄａｙｓ邋１，３，邋５，邋ａｎｄ邋７．邋＊尸邋＜邋０．０５，邋＊＊尸邋＜邋０．０１，ａｎｄ邋＊＊＊尸邋＜逡逑０．００１邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑

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本文編號(hào)：2813038