【摘要】： 艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)的簡(jiǎn)稱,是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染所引起的一組以嚴(yán)重細(xì)胞免疫功能缺陷為特征,并由此導(dǎo)致各種條件性感染或腫瘤的疾病。HIV主要侵犯、破壞CD4+淋巴細(xì)胞,使機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損,最終并發(fā)各種嚴(yán)重的機(jī)會(huì)性感染和腫瘤而導(dǎo)致死亡。自1985年我國(guó)發(fā)現(xiàn)首例HIV感染者以來(lái),HIV/AIDS在我國(guó)的傳播呈快速增長(zhǎng)的趨勢(shì),截至2007年底我國(guó)HIV感染者和AIDS患者約有70萬(wàn)人,全人群感染率為0.05%。 皮膚、粘膜是HIV侵襲的主要部位之一,有文獻(xiàn)報(bào)道AIDS相關(guān)的皮膚黏膜病變的發(fā)生率為66.7%～90.0%。其中30%～80%的HIV感染者存在口腔損害,主要的口腔相關(guān)病變有:口腔念珠菌病(oral candidiasis,OC)、毛狀白斑(Hairy Leukoplasia,HL)、Kaposi肉瘤(Kaposi's Sarcoma,KS)、非霍杰金淋巴瘤(non-Hodgkin's Lymphoma,NHL)、口腔皰疹、艾滋病相關(guān)牙周病、潰瘍性疾病等。其中口腔念珠菌病在HIV感染者的口腔損害中最為常見(jiàn),發(fā)病率為20.16%～56.00%。它是HIV感染者免疫抑制的早期征象,被視為發(fā)現(xiàn)和診斷AIDS的一項(xiàng)重要指征。 口腔念珠菌病的主要病原微生物是念珠菌。念珠菌是口腔內(nèi)的共棲菌群,在宿主防御功能降低的時(shí)候則會(huì)轉(zhuǎn)化為致病菌,故念珠菌為條件致病菌。決定念珠菌致病的主要因素是宿主免疫應(yīng)答的完整性,念珠菌本身的毒力變化也與致病過(guò)程密切相關(guān)。這些毒力因素包括黏附、與侵入相關(guān)的酶、表型轉(zhuǎn)換現(xiàn)象等。然而對(duì)于宿主感染HIV后口腔念珠菌是否發(fā)生毒力的改變,改變后毒力降低還是升高?目前的研究結(jié)果尚不一致。有些研究的結(jié)果為HIV感染者口腔念珠菌的毒力明顯高于HIV陰性者,而有些研究則認(rèn)為其毒力顯著低于HIV陰性者。 現(xiàn)已知并命名的念珠菌有81種,白色念珠菌是導(dǎo)致口腔念珠菌病最常見(jiàn)的病原,然而流行病學(xué)研究顯示非白色念珠菌如光滑念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、都柏林念珠菌等在HIV感染者口腔中的檢出率逐漸增加。因此了解HIV感染者口腔念珠菌病的菌種分布也對(duì)研究口腔念珠菌病的發(fā)生發(fā)展有著重要的意義。 目前國(guó)內(nèi)對(duì)于HIV感染者口腔念珠菌的檢出率及菌群分布的相關(guān)研究及數(shù)據(jù)還相當(dāng)少,因此,本研究選擇各82例HIV感染者及健康人,進(jìn)行了口腔念珠菌的檢出率及菌種分布的研究,同時(shí)選擇其中的部分菌株做進(jìn)一步相關(guān)毒力的研究,以期為HIV感染者口腔念珠菌病的預(yù)防和臨床治療提供線索和積累資料。 第一章HIV感染者口腔念珠菌檢出率及菌種分布 1.目的: 采集HIV感染者的口腔含漱液,進(jìn)行接種培養(yǎng),研究HIV感染者口腔念珠菌的檢出率及檢出的菌株種類。 2.方法: 采集82例HIV感染者含漱液樣本,并接種培養(yǎng)于沙保瓊脂培養(yǎng)基,通過(guò)形態(tài)學(xué)、染色性、念珠菌CHROMagar顯色培養(yǎng)基鑒定、45℃生長(zhǎng)試驗(yàn)、玉米吐溫80瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)、念珠菌API 20 C AUX鑒定等方法將念珠菌鑒定到種。 3.結(jié)果: 本組82例HIV感染者的口腔含漱液中,有60例可培養(yǎng)出念珠菌,檢出率為73.17%。在60例念珠菌檢出者中,有70%(42/60)可分離出白色念珠菌,73.33%(44/60)可分離出光滑念珠菌,1.67%(1/60)可分離出熱帶念珠菌,3.33%(2/60)可分離出近平滑念珠菌,1.67%(1/60)可分離出菌膜念珠菌。在60例念珠菌檢出者中,有51.67%(31/60)例菌種共存的情況,其中同時(shí)分離出白色念珠菌和光滑念珠菌的有29例。 本章實(shí)驗(yàn)共分離出211株念珠菌,其中光滑念珠菌103株,白色念珠菌95株,熱帶念珠菌4株,近平滑念珠菌4株,菌膜念珠菌2株,其他3株。 第二章健康對(duì)照人群口腔念珠菌檢出率及菌種分布 1.目的: 采集按年齡,性別配對(duì)原則納入研究的健康人的口腔含漱液,進(jìn)行接種培養(yǎng),比較健康人群和HIV感染者口腔念珠菌的檢出率及檢出的菌株種類差異。 2.方法: 采集82例性別、年齡均與HIV感染者配對(duì)的健康人的口腔含漱液,接種培養(yǎng)于沙保瓊脂培養(yǎng)基,通過(guò)形態(tài)學(xué)、染色性及念珠菌CHROMagar鑒定、45℃生長(zhǎng)試驗(yàn)、玉米吐溫80瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)、念珠菌API 20 C AUX鑒定等將念珠菌鑒定到種。 3.結(jié)果: 本組82例健康人的口腔含漱液中,有17例可培養(yǎng)出念珠菌,檢出率為20.73%。在17例念珠菌檢出者中,有64.71%(11/17)可檢出白色念珠菌,29.41%(5/17)可檢出近平滑念珠菌。 17例生長(zhǎng)念珠菌的樣本共分離出31株念珠菌,其中白色念珠菌15株,近平滑念珠菌12株,其他4株。 統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明,HIV感染者的念珠菌檢出率高于健康對(duì)照組(P0.01),在兩組念珠菌檢出陽(yáng)性人群中HIV感染者的白色念珠菌的檢出率與健康對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HIV感染者的光滑念珠菌的檢出率高于健康對(duì)照組(P0.01),健康對(duì)照組的近平滑念珠菌的檢出率高于HIV感染者(P0.01)。 第三章HIV感染者及健康人群口腔念珠菌臨床分離株毒力的體外實(shí)驗(yàn) 1.目的: 選取24株念珠菌臨床分離株做念珠菌相關(guān)毒力的研究,包括檢測(cè)其對(duì)頰黏膜上皮細(xì)胞的黏附性、磷脂酶活性及溶血性。 2.方法: 選取24株念珠菌臨床分離株,其中HIV感染者的選擇對(duì)象為CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)100/mm~3,并分為以下3組。A組為8株分離自HIV感染者的白色念珠菌;B組為8株分離自HIV感染者的光滑念珠菌;C組為8株分離自健康對(duì)照組的白色念珠菌。將—70℃保存的念珠菌臨床株接種到沙保瓊脂培養(yǎng)基上復(fù)蘇,37℃,18～24 h。 (1)念珠菌對(duì)頰黏膜上皮細(xì)胞的黏附性實(shí)驗(yàn) 將0.5ml頰黏膜上皮細(xì)胞和0.5ml念珠菌懸液混勻,水浴振蕩,微孔濾膜過(guò)濾。PBS沖洗,置載玻片10s,革蘭染色。計(jì)算每一菌株在頰黏膜上皮細(xì)胞的平均黏附數(shù)(每100個(gè)頰細(xì)胞上黏附的念珠菌個(gè)數(shù)),定義為H值。 (2)蛋黃平皿法測(cè)定念珠菌的磷脂酶活性 將10μL菌懸液滴于蛋黃培養(yǎng)基表面,37℃培養(yǎng)48 h后觀察結(jié)果。結(jié)果測(cè)定:磷脂酶陽(yáng)性的菌株在蛋黃培養(yǎng)基上的菌落周圍會(huì)形成一個(gè)與菌落共圓心的沉淀圈(環(huán)),測(cè)量菌落直徑和沉淀圈直徑。用Pz值表示酶的活力,Pz值=菌落直徑/沉淀圈直徑。 (3)溶血性的測(cè)定 將10μl菌懸液滴于濃縮羊血培養(yǎng)基上,37℃、5%CO_2培養(yǎng)48h。用透射光觀察菌落周圍,如果可觀察到半透明的與菌落共圓心相同的暈圈(環(huán))存在,則表示溶血性陽(yáng)性。測(cè)量菌落直徑和溶血環(huán)暈圈直徑并計(jì)算溶血指數(shù):溶血指數(shù)=菌落直徑/溶血環(huán)暈圈直徑。 3.結(jié)果: 3組念珠菌的H值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.182,P0.01)。進(jìn)一步作各組念珠菌H值兩兩比較,結(jié)果為:HIV感染者的白色念珠菌和健康對(duì)照組的白色念珠菌的H值差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HIV感染者的白色念珠菌與光滑念珠菌的H值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),健康對(duì)照組的白色念珠菌與HIV感染者的光滑念珠菌的H值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。即HIV感染者與健康對(duì)照組的口腔白色念珠菌臨床分離株對(duì)頰黏膜上皮細(xì)胞的黏附性沒(méi)有差異,但兩者均高于分離于HIV感染者口腔的光滑念珠菌的黏附性。 3組念珠菌的Pz值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=25.562,P0.01)。進(jìn)一步作各組念珠菌Pz值兩兩比較,結(jié)果為:HIV感染者的白色念珠菌和健康對(duì)照組的白色念珠菌的Pz值差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HIV感染者的白色念珠菌與光滑念珠菌的Pz值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),健康對(duì)照組的白色念珠菌與HIV感染者的光滑念珠菌的Pz值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。即HIV感染者與健康對(duì)照組的口腔白色念珠菌臨床分離株的磷脂酶活性沒(méi)有差異,但兩者均高于HIV感染者口腔光滑念珠菌的磷脂酶活性。 所有檢測(cè)菌株的溶血性均為陽(yáng)性。HIV感染者口腔白色念珠菌、健康對(duì)照組口腔白色念珠菌、HIV感染者口腔光滑念珠菌臨床分離株這3組的溶血指數(shù)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.284,P0.05)。 全文結(jié)論: 1.HIV感染者口腔念珠菌的檢出率為73.17%,主要菌種是白色念珠菌和光滑念珠菌,兩者可單獨(dú)檢出或共存。 2.健康對(duì)照組口腔念珠菌的檢出率為20.73%,主要菌種是白色念珠菌和近平滑念珠菌。HIV感染者的總的念珠菌檢出率高于健康對(duì)照組,兩組念珠菌檢出陽(yáng)性人群中HIV感染者光滑念珠菌的檢出率亦高于健康對(duì)照組,而HIV感染者的白色念珠菌的檢出率與健康對(duì)照組沒(méi)有區(qū)別。鑒于HIV感染者較健康人群更易發(fā)生口腔念珠菌感染,提示口腔念珠菌的增加是HIV感染者較健康人群更易感口腔念珠菌病的厲風(fēng)險(xiǎn)因子。 3.HIV感染者與健康對(duì)照組相比,口腔白色念珠菌的毒力沒(méi)有差異,而HIV感染者的光滑念珠菌的毒力低于HIV感染者和健康對(duì)照組的白色念珠菌,結(jié)合光滑念珠菌在兩組人群中的檢出率差異結(jié)果,說(shuō)明健康人群口腔中通常情況下不能生存的毒力低的光滑念珠菌可在HIV感染者口腔中定居。由于本組HIV感染者的CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)均小于100/mm~3(正常值為大于400/mm~3),提示口腔局部及全身免疫功能受到嚴(yán)重破壞、機(jī)體的有效防御性降低,可能是上述毒力低的光念珠菌定居的前提。進(jìn)而可能暗示,由于機(jī)體抵抗力的下降,對(duì)在HIV感染者口腔中定居的念珠菌群毒力要求其實(shí)較健康人群口腔中定居的毒力要求更低。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R512.91;R781.6
【圖文】：

光滑念珠菌(C.glabrata)，酵以細(xì)胞較

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2803156