【摘要】：目的:建立小鼠慢性根尖周炎模型,研究MITF(Microphthalmia-associated Transcription Factor,小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子)在小鼠實驗性根尖周炎中的表達(dá)情況。方法:選用25只6-8周齡、體重20-22g的C57BL/6J小鼠,采用對小鼠行雙側(cè)下頜第一磨牙開髓術(shù)后將髓腔暴露于口腔環(huán)境的方法,建立小鼠根尖周炎動物模型。分別于開髓后0周、1周、2周、3周、4周各時間點隨機(jī)處死5只小鼠,其中0周作為正常對照組。行多聚甲醛心內(nèi)固定,分離下頜骨,組織脫鈣,包埋,制備冰凍切片,HE染色觀察根尖周炎癥進(jìn)展的病理學(xué)變化,確認(rèn)小鼠根尖周炎動物模型建立成功。用MITF多克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,檢測其表達(dá)及分布。酶組織化學(xué)染色檢測根尖周組織周圍破骨細(xì)胞的表達(dá)以及MITF的表達(dá)與破骨細(xì)胞表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:1.HE染色HE染色的結(jié)果顯示,術(shù)后1周,小鼠下頜第一磨牙根尖周可見少量中性粒細(xì)胞浸潤;術(shù)后2周,下頜第一磨牙牙髓全部壞死,根尖周可見大量中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤;術(shù)后3周,炎癥浸潤范圍增大,淋巴細(xì)胞增多,牙槽骨出現(xiàn)破壞;術(shù)后4周,淋巴細(xì)胞持續(xù)增多,根尖周牙槽骨、牙骨質(zhì)出現(xiàn)不同程度的吸收。術(shù)后0周即空白對照組小鼠下頜第一磨牙牙槽骨未見破壞,無炎性細(xì)胞浸潤。HE染色結(jié)果顯示,成功建立了小鼠根尖周炎動物模型。2.免疫組織化學(xué)染色術(shù)后1周,下頜第一磨牙根尖周區(qū)域有少量MITF陽性細(xì)胞;術(shù)后2到4周,MITF陽性細(xì)胞逐漸增多,在第4周達(dá)到峰值。術(shù)后0周即正常對照組根尖周組織中有少量MITF陽性細(xì)胞。術(shù)后1到4周陽性表達(dá)數(shù)量均高于0周正常對照組,該結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3、酶組織化學(xué)染色術(shù)后1周,下頜第一磨牙根尖周區(qū)域有少量TRAP染色陽性細(xì)胞;術(shù)后2周,TRAP染色陽性細(xì)胞數(shù)量有所增加;術(shù)后3周,TRAP染色陽性細(xì)胞大量聚集,達(dá)到峰值;術(shù)后4周,TRAP染色陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少;正常對照組根尖周組織中可見個別TRAP染色陽性細(xì)胞。結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。MITF陽性染色OD值和TRAP陽性細(xì)胞計數(shù)值具有中度相關(guān)性。(r=0.690,P0.01)。結(jié)論:MITF在小鼠根尖周炎癥中有表達(dá),可能對小鼠根尖周炎癥進(jìn)展及骨破壞起促進(jìn)作用。但其在根尖周骨破壞及炎癥反應(yīng)的具體的功能作用有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R781.341
【圖文】：

單因素方差分析進(jìn)行各時間點比較，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。Pearson相關(guān)分析評價MITF陽性細(xì)胞OD值及TRAP陽性破骨細(xì)胞數(shù)間的相關(guān)性，P<0.01具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.HE染色100 倍鏡下小鼠根尖周組織的 HE 染色結(jié)果如圖 1 所示，術(shù)后 1 周，根尖組織區(qū)域出現(xiàn)漿液性滲出，炎性浸潤范圍較小，可見少量中性粒細(xì)胞浸潤；術(shù)后 2 周，根尖區(qū)炎性浸潤范圍增大，可見大量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，牙槽骨和牙骨質(zhì)吸收；術(shù)后 3 周，根尖周炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重，淋巴細(xì)胞逐漸增多，牙槽骨吸收加劇。術(shù)后 4 周，根尖周炎癥浸潤減少，多以淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等散分布，牙槽骨吸收明顯。正常對照組（0 周）根尖周偶有炎性細(xì)胞浸潤，牙槽骨未見異常。

2.免疫組織化學(xué)染色MITF免疫組化染色結(jié)果如圖2所示，為400倍鏡下各時間點小鼠根尖周組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，黑色箭頭所示為MITF陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞胞核染色呈棕黃色顆粒狀。正常對照組（0W）根尖周組織中有少量MITF陽性表達(dá)。術(shù)后1周到4周，小鼠根尖周組織中可見MITF陽性表達(dá)，并且有遞增趨勢。MITF陽性細(xì)胞所呈形態(tài)主要為圓形、卵圓形及梭形。多位于中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、破骨細(xì)胞的胞核內(nèi)。術(shù)后1周，根尖周炎性浸潤區(qū)可見少量MITF陽性細(xì)胞；術(shù)后2周，MITF陽性細(xì)胞數(shù)量增加；術(shù)后3周，MITF陽性細(xì)胞數(shù)量仍然有所增加；術(shù)后4周表達(dá)量持續(xù)增加。術(shù)后0周即正常對照組，根尖周組織中有少量MITF陽性表達(dá)。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果如圖3所示，為MITF在各時間點的表達(dá)量，以平均光密度值的大小表示；“*”表示不同時間點相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。即術(shù)后1周到4周，MITF表達(dá)量持續(xù)增加，術(shù)后0、1、2、3、4周間均具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）

圖 3MITF 在各時間點小鼠根尖周組織陽性染色 OD 值圖中相同符號（*）間表示任意兩時間點相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。組織化學(xué)染色TRAP染色結(jié)果如圖4所示，術(shù)后1周，根尖周牙槽骨周圍可見少量T的破骨細(xì)胞，胞漿呈醬紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色；術(shù)后2周，根尖周牙槽量的TRAP染色陽性細(xì)胞；術(shù)后3周，破骨細(xì)胞數(shù)量仍增加；術(shù)后4周所減少。術(shù)后0周即正常對照組，可見個別破骨細(xì)胞。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)，為各時間點的TRAP陽性染色細(xì)胞個數(shù)；圖A表示，術(shù)后0周即正常對3、4周間具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；圖B表示，術(shù)后2、3周間無統(tǒng)>0.05），與1、4周間有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果如F陽性染色OD值和TRAP陽性細(xì)胞計數(shù)值之間存在中度相關(guān)性（r = .05）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2801560