【摘要】：第一部分混旋聚乳酸/納米羥基磷灰石組織相容性研究 堅(jiān)強(qiáng)內(nèi)固定已經(jīng)廣泛應(yīng)用于顱頜面部骨折、正頜外科以及各種原因?qū)е碌墓侨睋p移植病例。隨著鈦板的應(yīng)用,金屬內(nèi)固定系統(tǒng)的組織相容性得到了很大改善。然而金屬內(nèi)固定系統(tǒng)存在諸多缺陷,諸如：金屬材料的機(jī)械性能與骨相差較大,導(dǎo)致應(yīng)力分布不均；存在應(yīng)力遮擋效應(yīng),妨礙初期骨痂的迅速形成；在兒童患者,由于妨礙顱面骨的發(fā)育,需二次手術(shù)等。因此,可吸收板以及相關(guān)材料的研究已廣泛展開(kāi),并通過(guò)局部使用生長(zhǎng)因子、改善局部微環(huán)境來(lái)提高實(shí)驗(yàn)或臨床效果。目前,可吸收板已經(jīng)廣泛應(yīng)用于顱頜面部骨折和骨切開(kāi)手術(shù),但一些病例出現(xiàn)了感染、異物反應(yīng)、錯(cuò)合和錯(cuò)位骨連接等并發(fā)癥,這與可吸收板的生物相容性、降解速度、降解過(guò)程中力學(xué)強(qiáng)度的變化以及可吸收板及其降解產(chǎn)物對(duì)周?chē)h(huán)境的影響有關(guān)。 混混旋聚乳酸是一種優(yōu)良的醫(yī)用高分子材料,具有無(wú)毒性、可生物降解性和易于加工等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)廣泛應(yīng)用于組織工程、藥物載體、骨內(nèi)固定等領(lǐng)域。盡管混旋聚乳酸在體內(nèi)可以完全降解,但它是一種非結(jié)晶態(tài)材料,由于分子量小,其機(jī)械強(qiáng)度低,降解速度過(guò)快,往往只用于松質(zhì)骨固定。在混旋聚乳酸材料中加入一定量的生物陶瓷后,能夠增加其機(jī)械強(qiáng)度,減緩降解速度,其生物力學(xué)性能適宜于制作用于骨折內(nèi)固定的可吸收板。羥基磷灰石(hydroxyapatite, Ha)具有良好的生物活性和骨傳導(dǎo)活性,廣泛的應(yīng)用于骨缺損的修復(fù)重建。然而,由于HAP的力學(xué)性能較差、脆性大、對(duì)負(fù)荷承載性差,在體內(nèi)不能被吸收,從而限制了它的臨床應(yīng)用。PDLLA/nano-Ha板是在PDLLA基質(zhì)中加入一定比例的nano-Ha,能夠增強(qiáng)可吸收板的機(jī)械強(qiáng)度,減緩降解速度,促進(jìn)骨愈合。然而在一些長(zhǎng)期研究中,可吸收材料的最終降解產(chǎn)物會(huì)引起宿主的免疫反應(yīng),發(fā)生炎性變化,甚至化膿。我們期望通過(guò)對(duì)該材料與成骨細(xì)胞的共培養(yǎng)來(lái)研究其對(duì)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖的影響,探討該材料是否存在細(xì)胞毒性作用。 用于體外研究的成骨細(xì)胞已成系列,包括原代分離培養(yǎng)的成骨細(xì)胞及克隆傳代的成骨樣細(xì)胞株。原代培養(yǎng)獲取成骨細(xì)胞的方法有組織塊法、酶消化法、骨膜組織塊法、骨髓組織塊法以及薄層骨片經(jīng)EDTA處理并經(jīng)膠原酶消化,但所得到細(xì)胞的純度不一。兩種酶混合多次消化、反復(fù)貼壁等方法能夠獲得純度較高的細(xì)胞。 胎鼠顱骨細(xì)胞是骨形成細(xì)胞,屬成骨前體細(xì)胞,對(duì)骨組織的生長(zhǎng)、發(fā)育、骨代謝平衡、骨量維持和損傷修復(fù)起關(guān)鍵作用,將其與PDLLA/nano-Ha共培養(yǎng),可以觀察PDLLA/nano-Ha對(duì)這種成骨前體細(xì)胞粘附及增殖的影響。通過(guò)觀察細(xì)胞周期的變化來(lái)了解PDLLA/nano-Ha對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響可以分析PDLLA/nano-Ha的組織相容性。另外,成骨細(xì)胞形態(tài)的變化直接影響細(xì)胞的功能。因此,混旋聚乳酸(PDLLA)是一種具有良好生物相容性和生物降解性的聚合物,但親水性較差,降解中間產(chǎn)物乳酸偏酸性可能會(huì)抑制成骨細(xì)胞生長(zhǎng),還有因降解速度較快導(dǎo)致機(jī)械強(qiáng)度保持時(shí)間不夠等缺點(diǎn)。PDLLA/nano-Ha板復(fù)合材料中的nano-Ha可能改善其性能,使其在體內(nèi)不影響骨愈合或?qū)怯暇哂幸欢ǔ潭鹊姆e極作用。 對(duì)PDLLA/nano-Ha影響成骨細(xì)胞基因調(diào)控過(guò)程的研究將有助于了解PDLLA/nano-Ha促成骨的機(jī)制,并將為研究骨缺損病變的修復(fù)過(guò)程和影響因素及加速骨重塑的方法等提供大量的信息。骨核心結(jié)合因子α1(Cbfα1)是成骨細(xì)胞分化和骨發(fā)育的控制基因,對(duì)牙骨質(zhì)及牙槽骨的發(fā)育同樣有重要作用。成骨細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(ALP)的mRNA轉(zhuǎn)錄在其增殖早期就已經(jīng)出現(xiàn),在增殖后期,其ALP活性可增加2-3倍,然而mRNA的轉(zhuǎn)錄水平則仍可維持較低水平。骨鈣素(BGP)的mRNA表達(dá)在礦化期開(kāi)始,并逐漸達(dá)到高峰。Ⅰ型膠原蛋白(Col-Ⅰ)和ALP等的表達(dá)不儀代表了成骨細(xì)胞的不同分化階段,而目.它們往往對(duì)成骨細(xì)胞的表型發(fā)育起著一定的誘導(dǎo)作用。鈣、磷是體內(nèi)必需的礦物元素,也是體內(nèi)最多的礦物元素,是構(gòu)成骨骼的主要成分。 本部分研究旨在通過(guò)檢測(cè)混旋聚乳酸／納米羥基磷灰石板對(duì)胎鼠顱骨成骨細(xì)胞及細(xì)胞增殖的影響、成骨細(xì)胞內(nèi)Cbfα1、ALP、Col-I和BGP的mRNA的表達(dá)以及培養(yǎng)環(huán)境中鈣、磷成分的變化,探討PDLLA/HAP的生物相容性、影響成骨細(xì)胞基因的調(diào)控機(jī)制及其對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的作用,以期為PDLLA/nano-Ha板的實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)一胎鼠成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的建立及鑒定 本實(shí)驗(yàn)的目的為采用兩種酶混合多次消化、反復(fù)貼壁等方法,以獲得孕21天胎鼠顱骨中的大量純度較高的成骨細(xì)胞,為骨代謝的研究奠定基礎(chǔ)Ⅱ。 材料與方法分離21天孕齡的SD大鼠胎鼠顱骨,剪碎,用Ⅱ型膠原酶(2mg/ml)及胰酶(0.25%)的混合液消化,將后三次所得懸浮液混合后離心,收集細(xì)胞,重懸后接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。采用“反復(fù)貼壁法”再次純化成骨細(xì)胞。待培養(yǎng)瓶的成骨細(xì)胞長(zhǎng)滿90%后,加入適量的0.25%的胰蛋白酶再次消化并傳代。用倒置顯微鏡觀察原代培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài),并進(jìn)行攝片。 采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)及礦化結(jié)節(jié)染色鑒定成骨細(xì)胞。RT-PCR取第2代胎鼠顱骨成骨細(xì)胞,設(shè)計(jì)引物,每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)重復(fù)。礦化結(jié)節(jié)染色法為取第2代胎鼠顱骨成骨細(xì)胞接種于6孔板內(nèi),用骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),7天后進(jìn)行改良Von Kossa染色。 結(jié)果原代胎鼠顱骨細(xì)胞光鏡下表現(xiàn)為細(xì)胞體積較大,呈鱗片狀,胞漿豐富,多偽足。RT-PCR結(jié)果骨鈣素、Ⅰ型膠原蛋白、內(nèi)參β-actin基因的擴(kuò)增曲線平滑,均有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,擴(kuò)增效率良好。鈣化結(jié)節(jié)染色培養(yǎng)板底長(zhǎng)出肉眼可見(jiàn)的結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu),見(jiàn)大量黑色結(jié)節(jié)狀物形成。 結(jié)論兩種酶混合多次消化與差速貼壁純化法,使分離的成骨細(xì)胞具有數(shù)量大、純度高、生長(zhǎng)旺盛和成活率高等優(yōu)點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)二PDLLA/nano-Ha對(duì)胎鼠顱骨細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞增殖的影響 本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)掃描電鏡、細(xì)胞周期的變化、細(xì)胞增殖的檢測(cè)等方法觀察成骨細(xì)胞在體外與PDLLA/nano-Ha共培養(yǎng)時(shí)其在該材料上形態(tài)特征的變化,探討材料對(duì)成骨細(xì)胞形態(tài)特征和增殖活性的影響。 材料與方法將PDLLA/nano-Ha的材料塊制成底面長(zhǎng)寬為10mmm*7mm,高3mm的塊狀,共33塊,環(huán)氧乙烷消毒備用。PDLLA/nano-Ha為實(shí)驗(yàn)組,聚氯乙烯為對(duì)照組。本研究在更換條件培養(yǎng)液前均用不完全的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h,使細(xì)胞同處在GO期。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均由第四代成骨細(xì)胞所得。用完全培養(yǎng)液浸透實(shí)驗(yàn)材料24h,接種第四代胎鼠顱骨細(xì)胞到各組材料中培養(yǎng)。在培養(yǎng)的第1d,4d,7d取出材料,固定,乙醇脫水,無(wú)水乙醇脫水冷凍干燥、噴金,掃描電鏡下觀察。 成骨細(xì)胞增殖的檢測(cè)采用cck-8法。將第四代胎鼠顱骨細(xì)胞等量接種到各組材料表面,不加材料、細(xì)胞及培養(yǎng)液為空白對(duì)照。分別在培養(yǎng)第4、7、14、21d結(jié)束前4h加入cck-8試劑,孵育,將懸液轉(zhuǎn)移至96孔板內(nèi),在酶標(biāo)儀上讀取450nm波長(zhǎng)下的OD值。成骨細(xì)胞細(xì)胞周期的檢測(cè)為接種第四代胎鼠顱骨細(xì)胞至裝有材料塊(設(shè)置陰性對(duì)照和空白對(duì)照)的12孔板中,培養(yǎng)4、7、14、21天,收集細(xì)胞,清洗,固定,離心,重懸,加入RNAse,30min；加入碘化丙啶(PI),避光染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè),根據(jù)軟件分析每例標(biāo)本的Gl期、S期和G2期細(xì)胞數(shù),計(jì)算細(xì)胞各周期時(shí)相在細(xì)胞周期中所占百分比,進(jìn)行細(xì)胞周期分析。以增殖指數(shù)(proliferation index,PI)表示各實(shí)驗(yàn)組對(duì)OB增殖的影響：PI=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100％。采用SPSS10.0軟件的One WayANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果與PDLLA/nano-Ha組材料共培養(yǎng)1d,4d,7d后,掃描電鏡觀察結(jié)果表明細(xì)胞形態(tài)完整,表面粗糙,有豐富的針狀突起,突起之間有連接,而且細(xì)胞開(kāi)始重疊生長(zhǎng),隨時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞的數(shù)量隨之增多,細(xì)胞形態(tài)由突起于材料表面逐漸變?yōu)楸馄?與材料緊密貼合。采用cck-8法檢測(cè)與各實(shí)驗(yàn)材料共培養(yǎng)后細(xì)胞的增殖能力,發(fā)現(xiàn)各組細(xì)胞均隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增殖,在第4d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞開(kāi)始重疊生長(zhǎng),第14d達(dá)到峰值,后開(kāi)始稍有減弱。與陰性對(duì)照組比較,PDLLA/nano-Ha組各時(shí)間點(diǎn)的吸光度值均較陰性對(duì)照組略低,沒(méi)有顯著差異(P0.05)。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：4天時(shí)PDLLA/nano-Ha組能顯著的誘導(dǎo)細(xì)胞停留在G2/M期(P≤0.05),S期細(xì)胞明顯少于陰性對(duì)照組(P≤0.05)；7天時(shí)PDLLA/nano-Ha組G2/M期的細(xì)胞稍少于對(duì)照組(P0.05),S期的細(xì)胞百分比顯著少于對(duì)照組(P≤0.05),滯留在G0/G1期的細(xì)胞則稍多于對(duì)照組(P0.05),但較4天時(shí)S期的細(xì)胞明顯增多(P≤0.05);14天時(shí)S期細(xì)胞明顯多于對(duì)照組(P≤0.05),但G2/M期顯著少于對(duì)照組(P≤0.05),G0/G1期與對(duì)照組差異不明顯(P0.05)：21天時(shí)PDLLA/nano-Ha組S期細(xì)胞顯著少與對(duì)照組(P≤0.05),滯留在GO/G1期的細(xì)胞較對(duì)照組稍高(P0.05),但明顯比PDLLA/nano-Ha組4天,7天,14天時(shí)增多(P≤0.05),G2/M期的細(xì)胞百分比較對(duì)照組略低,但明顯比PDLLA/nano-Ha組4天,7天,14天時(shí)降低(P≤0.05)。增殖指數(shù)PI值,PDLLA/nano-Ha組在4,7,14,21天時(shí)均略低于對(duì)照組(P0.05),在4天,7天時(shí)逐漸升高,在14天時(shí)開(kāi)始降低。 結(jié)論在與PDLLA/nano-Ha共培養(yǎng)時(shí),成骨細(xì)胞可以在PDLLA/nano-Ha材料表面很好的粘附和增殖,PDLLA/nano-Ha對(duì)成骨細(xì)胞形態(tài)和增殖的影響很小。PDLLA/nano-Ha對(duì)成骨細(xì)胞還有一定促成骨細(xì)胞分化的潛力。 實(shí)驗(yàn)三PDLLA/nano-Ha對(duì)成骨細(xì)胞標(biāo)志性蛋白mRNA表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的影響 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)細(xì)胞與PDLLA/nano-Ha共培養(yǎng),研究其對(duì)成骨細(xì)胞內(nèi)Cbf α1、 ALP、Col-I和BGP的mRNA表達(dá)影響,探討PDLLA/nano-Ha影響成骨細(xì)胞基因可能存在的調(diào)控機(jī)制;并根據(jù)培養(yǎng)環(huán)境中鈣、磷濃度的變化,分析其對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的影響,以期為PDLLA/nano-Ha板的實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 材料與方法將PDLLA/nano-Ha制備成一定大小消毒備用。接種第四代胎鼠顱骨細(xì)胞到各組材料中,培養(yǎng),隔日換液。分別在換液后第4、7、14、21天收樣。提取總RNA-70℃保存?zhèn)溆�。根�?jù)GenBank中鼠β-actin mRNA、ALP mRNA、 Col-I mRNA、Cbfal mRNA和BGP mRNA全序列,應(yīng)用Clone Manager設(shè)計(jì)引物,每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)重復(fù)。Ca、P含量檢測(cè)采用收集第2,4,6,8,10,12,14,16,18,20天的培養(yǎng)液各10ml,參照周?chē)?guó)君的方法于原子吸收分光光度儀測(cè)Ca、P吸光度值,繪制工作曲線,計(jì)算Ca、P離子濃度。采用SPSS10.0軟件的One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果兩組Cbf α1mRNA從第4天開(kāi)始表達(dá),隨著細(xì)胞的增殖而增加。在第4、7、14、21天時(shí),PDLLA/nano-Ha組成骨細(xì)胞Cbf α1mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,兩者有顯著差異。 兩組Col-I mRNA從增殖初期開(kāi)始表達(dá)后,表達(dá)水平在第7天后明顯提高,而且隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而增加。在第7、14、21天時(shí),PDLLA/nano-Ha組成骨細(xì)胞Col-I mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,兩者有顯著差異(P0.01)。 隨著細(xì)胞的增殖,成骨細(xì)胞內(nèi)ALP mRNA的表達(dá)水平先增高后降低,在第7天時(shí)達(dá)到最高。在第4,7,14天時(shí),PDLLA/nano-Ha組成骨細(xì)胞ALP mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,兩者有顯著差異(P0.01)。隨著細(xì)胞進(jìn)入礦化期,兩組成骨細(xì)胞ALP mRNA表達(dá)均減少。 BGP mRNA從第4天開(kāi)始表達(dá),在14天時(shí)達(dá)到峰值。在第4、7、14、21天時(shí),PDLLA/nano-Ha組成骨細(xì)胞Cbf α1mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,兩者有顯著差異(P0.01)。 培養(yǎng)環(huán)境中Ca含量檢測(cè)顯示除第16天、第18天外,PDLLA/nano-Ha組培養(yǎng)液中Ca離子含量高于對(duì)照組,差異明顯(P0.05);在第14天后突然降低,PDLLA/nano-Ha組下降幅度明顯高于對(duì)照組(P0.05)。磷酸鹽含量測(cè)定結(jié)果顯示在第6天,第8天,10天,12天,14天,16天時(shí)PDLLA/nano-Ha組培養(yǎng)液中磷酸鹽含量低于對(duì)照組,第16天時(shí)差異最明顯(P0.05), PDLLA/nano-Ha組下降幅度略高于對(duì)照組(P0.05),第4天時(shí)緩緩升高,14天時(shí)再次大幅降低,在第16天時(shí)最低,PDLLA/nano-Ha組下降幅度明顯高于對(duì)照組(P0.05),18天后兩組磷酸鹽含量均緩緩上升。 結(jié)論成骨細(xì)胞與PDLLA/nano-Ha復(fù)合材料共培養(yǎng)后,在細(xì)胞增殖后期,均能促進(jìn)Cbfα1、ALP、Col-I和BGP的mRNA表達(dá);在基質(zhì)成熟與礦化期抑制ALP的mRNA表達(dá),在礦化期減少BGP的mRNA表達(dá),但Cbfα1、Col-I的mRNA表達(dá)被不斷加強(qiáng),表明在增殖后期與分化早期PDLLA/nano-Ha能不斷促進(jìn)成骨細(xì)胞分化,而在分化晚期(礦化期)卻降低了細(xì)胞分化的速度。同時(shí)PDLLA/nano-Ha還通過(guò)改變培養(yǎng)液鈣磷濃度促進(jìn)成骨細(xì)胞分泌的體外基質(zhì)礦化。 第二部分PDLLA/nano-Ha可吸收板固定兔下頜骨骨折的實(shí)驗(yàn)研究 本部分在第一部分的基礎(chǔ)上,通過(guò)研究PDLLA/nano-Ha可吸收板固定下頜骨骨折的愈合過(guò)程,探討該可吸收板在頜骨骨折的可行性,并通過(guò)局部使用富含血小板血漿(Platelet-rich Plasma, PRP),以促進(jìn)骨折愈合進(jìn)程,減少并發(fā)癥的發(fā)生 材料和方法將混旋聚乳酸/納米羥基磷灰石可吸收板性能同第一部分,制成定大小消毒備用。選取成年雄性、體重2.5-3.0kg新西蘭兔32只為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。制備PRP。將32只新西蘭兔隨機(jī)分為2周、4周、8周和12周4個(gè)時(shí)間段,每個(gè)時(shí)間段8只。每時(shí)間段隨機(jī)分為兩組,每組四只,分別為PDLLA/nano-Ha可吸收板組和PDLLA/nano-Ha可吸收板+PRP組。分別于兩側(cè)下頜骨造成實(shí)驗(yàn)性骨折,用PDLLA/nano-Ha可吸收板固定,一側(cè)加PRP,另一側(cè)不加。進(jìn)行大體觀察、X線檢查,HE染色和透射電鏡觀察以及免疫組織化學(xué)檢查。大體觀察：觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后全身一般情況,注意骨折局部傷口情況,是否有紅腫、溢膿、瘺道出現(xiàn)。骨折端有無(wú)移位及異常活動(dòng)。X線檢查：術(shù)后2、4、8、12周分批處死動(dòng)物,取出下頜骨后在46Kv,100mA,0.04S,100cm的條件下進(jìn)行X線攝片,觀察骨折愈合情況。組織學(xué)檢查：在連接骨痂部位取材兩塊,一塊進(jìn)行HE染色；另一塊制成超薄切片,醋酸鈾及枸櫞酸鉛雙重染色,JM-1200透射電鏡下觀察。 結(jié)果各組動(dòng)物切口均Ⅰ期愈合,骨折無(wú)移位,咬合正常。 標(biāo)本大體觀察顯示2周時(shí),PDLLA-nano/HA可吸收板組和PDLLA-nano/HA可吸收板+PRP組可吸收板表面均較粗糙,未見(jiàn)明顯降解產(chǎn)物；骨斷端可輕微活動(dòng),骨折線覆蓋有致密組織,兩組未見(jiàn)明顯差別。4周時(shí),PDLLA-nano/HA可吸收板組和骨折線仍可見(jiàn),表面覆蓋薄層骨痂。PDLLA-nano/HA可吸收板+PRP組骨折線較模糊,表面覆蓋骨樣組織,質(zhì)地較硬。骨斷端不活動(dòng)。可吸收板表面均出現(xiàn)蟲(chóng)噬狀吸收,少數(shù)板表面有少量乳白色降解產(chǎn)物。8周時(shí),兩組骨斷端均為骨性連接,無(wú)活動(dòng)。12周時(shí),兩組骨斷端均為骨性連接,可吸收板有明顯降解,但無(wú)碎裂。 X線平片檢查結(jié)果顯示術(shù)后第2周,兩側(cè)骨折對(duì)位良好,無(wú)錯(cuò)位,骨折線清晰可見(jiàn),骨皮質(zhì)不連續(xù),鄰近骨小梁紊亂。術(shù)后第4周可吸收板側(cè)骨折線稍模糊,骨髓腔內(nèi)可見(jiàn)骨痂影像,鄰近骨小粱仍然紊亂。術(shù)后第8周兩組影像無(wú)明顯區(qū)別,骨折線均模糊不清。術(shù)后第12周兩組骨折線消失,骨小梁數(shù)量增多,骨小梁排列趨為整齊。 光鏡觀察術(shù)后第2周,雙側(cè)骨折端有大量成纖維細(xì)胞和新生毛細(xì)血管,PDLLA-nano/HA可吸收板組骨折端附近可見(jiàn)少量成骨細(xì)胞和新生骨樣組織。PDLLA-nano/HA可吸收板+PRP組可見(jiàn)較多的成骨細(xì)胞排列成排,附近有較多的新生骨樣組織。術(shù)后第4周,PDLLA-nano/HA可吸收板組成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞數(shù)目增多,新生骨樣組織較第2周時(shí)增多,但骨折端仍有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),見(jiàn)圖4-2; PDLLA-nano/HA可吸收板+PRP組骨折端成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞豐富,炎性細(xì)胞減少,見(jiàn)圖4-3；術(shù)后第8周,兩組均可見(jiàn)新形成的骨小梁和軟骨豐富,成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞多見(jiàn)。術(shù)后第12周,兩組骨折區(qū)接近鄰近正常骨組織結(jié)構(gòu),骨基質(zhì)中骨細(xì)胞數(shù)目接近正常。骨小梁密集,排列與鄰近骨組織中骨小梁相似。 透射電鏡觀察顯示骨折后第2周,PDLLA-nano/HA可吸收板+PRP組骨痂內(nèi)可見(jiàn)到功能活躍的成骨細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)成長(zhǎng)柱形,胞核卵圓或呈梭形,核仁明顯,核周有異染色質(zhì)聚集。胞漿內(nèi)有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體,高爾基器發(fā)達(dá),見(jiàn)圖4-4。PDLLA-nano/HA可吸收板組成骨細(xì)胞較扁平。術(shù)后第4和第8周,兩組骨痂內(nèi)成骨細(xì)胞數(shù)量均增多,功能極為活躍,有分裂增殖現(xiàn)象。骨痂內(nèi)可見(jiàn)大量骨細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)長(zhǎng)圓形或卵圓形,位于骨陷窩內(nèi),核周有異染色質(zhì)聚集。 結(jié)論P(yáng)DLLA/nano-Ha可吸收板組織相容性好,降解速度適中,強(qiáng)度能夠滿足骨折固定的需要,使用PRP可能有助于骨創(chuàng)得早期愈合。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R782
【圖文】：

內(nèi)參 3 -actin圖1-2骨1?素、I型膠原蛋白和內(nèi)參P-actin基因RT-PCR擴(kuò)增曲線Figure 1-2 RT-PCR amplification curves of osteocalcin, Type I collagen and P-actingene.n—‘ ‘ ~—^ 1 ji? ^~： :- 1* / ‘ ' '■ ' J ...,. :..‘‘-.‘‘‘ ‘ ,“'=>h'?*■ f, 氣.‘1=> M- ?，-. ‘_ _ I圖1-3 f5化結(jié)節(jié)染色(光鏡,200X)，箭頭示媽化結(jié)節(jié).Figure 1-3 Calcified nodules staining under LM (200x).

I型膠原蛋白}

本文編號(hào)：2801285