【摘要】：目的:舌鱗狀細(xì)胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC),簡稱舌鱗癌,為口腔頜面部常見惡性腫瘤之一,具有惡性程度高、局部復(fù)發(fā)率高、早期易發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等表現(xiàn),預(yù)后較差。臨床上對舌鱗癌患者多應(yīng)用以外科手術(shù)為主,輔以放療、化療或靶向治療等方法的綜合治療方案。舌為重要的功能器官,多數(shù)中、晚期患者行根治性手術(shù)后往往造成言語、咀嚼及吞咽等方面不同程度的功能障礙,故“早診斷、早治療”已逐漸引起臨床醫(yī)師的普遍重視。因此,近年來的研究熱點(diǎn)集中于對舌鱗癌中異常表達(dá)基因的篩查,以助于舌鱗癌的早期發(fā)現(xiàn)和輔助治療。Micro RNAs為一類非編碼單鏈RNA分子,長度約為20~25 nt,通過與靶基因3’端非編碼區(qū)完全或者不完全配對,導(dǎo)致目的基因沉默或阻斷目的基因的翻譯過程來調(diào)節(jié)基因表達(dá)活性,使細(xì)胞生物學(xué)行為發(fā)生改變或?qū)е履承┘膊〉陌l(fā)生和發(fā)展。故本研究擬通過分子及細(xì)胞生物學(xué)方法探究microRNA-27a在舌鱗癌組織中的表達(dá)異常,并分析其對舌鱗癌細(xì)胞增殖和凋亡行為的影響。方法:收集2015年9月至2017年9月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔頜面外科具有完整病歷資料的35例舌鱗癌患者腫瘤組織標(biāo)本及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本。其次,應(yīng)用RT-qPCR方法分別檢測舌鱗癌腫瘤組織標(biāo)本、相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本、舌鱗癌cal-27細(xì)胞以及人正常組織來源hek-293細(xì)胞中microRNA-27a的表達(dá)水平。再次,應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將microRNA-27a inhibitor轉(zhuǎn)染入舌鱗癌cal-27細(xì)胞中。進(jìn)一步分別采用MTS法、Annexin V-FITC(14)PI雙染法與流式細(xì)胞術(shù)檢測microRNA-27a對舌鱗癌cal-27細(xì)胞活力及凋亡行為的影響。實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,均以P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:RT-qPCR結(jié)果顯示,microRNA-27a在35例舌鱗癌患者腫瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)量為癌旁組織的2.81±3.17倍,相比上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。舌鱗癌cal-27細(xì)胞中mi R-27a的表達(dá)水平較正常hek-293細(xì)胞上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。通過轉(zhuǎn)染microRNA-27a inhibitor敲低了舌鱗癌cal-27細(xì)胞中microRNA-27a的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MTS與細(xì)胞凋亡實驗結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染microRNA-27a inhibitor組分別與microRNA-27a inhibitor negative control組和mock組相比,microRNA-27a inhibitor組舌鱗癌cal-27細(xì)胞活力降低,凋亡比例增加,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P(27)0.05)。結(jié)論:MicroRNA-27a在舌鱗癌中表達(dá)上調(diào),具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡的功能,在舌鱗癌發(fā)生和發(fā)展過程中可能發(fā)揮癌基因的作用。推測microRNA-27a具有成為新診治靶點(diǎn)的潛在價值,可為舌鱗癌的早期診斷及完善綜合治療方案提供幫助。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.86
【圖文】：

結(jié) 果1. MiR-27a在TSCC腫瘤組織標(biāo)本及舌鱗癌cal-27細(xì)胞中均表達(dá)上調(diào)MiR-27a的熔解曲線(圖1 D)和擴(kuò)增曲線(圖1 E)顯示出RT-qPCR的條件是可靠的。RT-qPCR 結(jié)果顯示，在 35 例組織標(biāo)本中有 80.00% (28/35)腫瘤組織中 miR-27a 的表達(dá)水平較相應(yīng)癌旁組織上調(diào)(圖 1 A)。統(tǒng)計結(jié)果表明，miR-27a 的表達(dá)水平在腫瘤組織(C)中較癌旁組織(N)上調(diào)，為癌旁組織的 2.81±3.17 倍，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) (圖 1 B)。進(jìn)一步通過對比舌鱗癌 cal-27 細(xì)胞與正常 hek-293 細(xì)胞中 miR-27a 的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，miR-27a 在舌鱗癌 cal-27 細(xì)胞中也呈現(xiàn)表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) (圖 1 C)。這些結(jié)果表明 miR-27a 在 TSCC 的發(fā)生和發(fā)展中可能起重要作用。2. 敲低舌鱗癌 cal-27 細(xì)胞中 miR-27a 的表達(dá)水平可抑制細(xì)胞活力在轉(zhuǎn)染實驗24h后RT-qPCR結(jié)果顯示，miR-27a inhibitor組中miR-27a的表達(dá)水平較 miR-27a inhibitor NC 組和 mock 組下調(diào)

圖 2 通過 MTS 實驗檢測低表達(dá) miR-27a 對 cal-27 細(xì)胞活力的影響Fig.2 Through MTS assays effects of miR-27a low expression on the ceproliferation of cal-27 were detected.(A) Transfection efficiency of the corresponding miRNAs in the cal-27 ceby RT-qPCR. After transfection, the expression of miR-27a or the contrmiRNAs in the cal-27 cells were monitored using RT-qPCR. (B) Effect miR-27a on the cal-27 cell proliferation measured by the MTS assay. Cal-2cells were transfected with miR-27a or the control miRNAs in the Cal-27 ceand the cell proliferation was detected using the MTS assay.Data weexpressed as the mean ± SD from three independent experiments. P < 0.05 indicated as symbol *.

圖 3 MiR-27a 對 cal-27 細(xì)胞凋亡的影響Fig.3 Effects of miR-27a on the apoptosis of cells cal-27.(A) The flow cytometry assays were performed to detect the cell apoptosis rateof cal-27 cells. (B) Effect of miR-27a on the apoptosis of the Cal-27 cell lines.Cal-27 cells were transfected with miR-27a or the control miRNAs and treatedby Annexin V-FITC PI apoptosis detection kit. The apoptotic percentages ofthe Cal-27 cells in different groups were monitored by flow cytometry.. Datawere expressed as the mean ± SD from three independent experiments.P < 0.05 is indicated as symbol *.

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2795847