【摘要】： 粘液表皮樣癌是一種常見的涎腺惡性腫瘤，其中低分化型腫瘤具有侵襲性強(qiáng)、轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差的特點(diǎn)。目前，治療低分化型粘液表皮樣癌仍以外科手術(shù)為主，并輔以放療或化療，然而，臨床療效不令人滿意。因此，很有必要探索新的治療手段。近年來興起的基因治療為腫瘤治療提供了新的途徑。抑癌基因替代療法是腫瘤基因治療的有效策略之一，p53抑癌基因已用于惡性腫瘤的臨床治療試驗(yàn)。PTEN (phosphatase and tensin homology deleted onchromosome 10)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的抑癌基因，許多研究表明，將野生型PTEN基因?qū)肽X膠質(zhì)瘤、前列腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞，產(chǎn)生顯著的抑癌效應(yīng)，有望成為治療腫瘤的候選基因。目前，尚未見有關(guān)涎腺粘液表皮樣癌基因治療研究的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究以高轉(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞系M3SP2為研究對(duì)象，首次探討外源性野生型PTEN抑癌基因?qū)Ω咿D(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，主要研究方法和結(jié)果包括以下幾個(gè)方面： 1．穩(wěn)定表達(dá)外源性PTEN抑癌基因的高轉(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞系的建立免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示涎腺粘液表皮樣癌、腺樣囊性癌、舌癌、口底癌、頰癌等8例細(xì)胞系中有3例PTEN蛋白表達(dá)缺失，1例為頰癌細(xì)胞系，另2例為高轉(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌和高轉(zhuǎn)移性舌癌細(xì)胞系，提示PTEN蛋白表達(dá)缺失與其高轉(zhuǎn)移特性有一定關(guān)系。應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)方法野生型PTEN抑癌基因?qū)敫咿D(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞系M3SP2，經(jīng)嘌呤霉素篩選，免疫印跡試驗(yàn)和免疫 京口軍巴大學(xué)派士學(xué)位論文－3． 組化染色證實(shí)，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)外源性野生型PTEN蛋白，細(xì)胞命名為 M3 SPZ－PIFN，該細(xì)胞為粘液表皮樣癌的抑癌基因替代療法研究提供了實(shí)驗(yàn)?zāi)?型。轉(zhuǎn)染空白載體的對(duì)照細(xì)胞命名為M3SPZ下Bp。 2．PTEN抑癌基因?qū)Ω咿D(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響 應(yīng)用 光鏡和電鏡觀察、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定、軟瓊脂克隆測(cè)定、裸鼠異種移植等方法， 發(fā)現(xiàn)外源性野生型PTEN抑癌基因能夠有效抑制高轉(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞體 外和裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)。M3 SPZF 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，分裂相很少，細(xì)胞數(shù)量少、 體積較大，部分細(xì)胞空泡變性，細(xì)胞膜彭出，細(xì)胞表面微絨毛少，線粒體數(shù)量 少并發(fā)生腫脹，較多的溶酶體融合，染色質(zhì)凝集，體外培養(yǎng)第3、5、7d細(xì)胞 生長(zhǎng)抑制率分別為57刀5％、62尸6％和刀．46％，分裂指數(shù)為16二％O，克隆形成 抑制率為 72刀％，棵鼠移植瘤抑制率達(dá) 63．82％，與對(duì)照細(xì)胞 M3 SPZ比較有極 顯著性差異（P＜o(jì)．01）。 3．PTEN抑癌基因?qū)Ω咿D(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞抑制機(jī)理的研究 流 式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示M3SPZ－PTEN細(xì)胞0期停滯。形態(tài)學(xué)觀察和原位凋亡細(xì)胞 檢測(cè)可見體外培養(yǎng)M3SPZ－PTEN細(xì)胞及其裸鼠異種移植細(xì)胞可見凋亡形態(tài)， 即細(xì)胞皺縮、胞膜膨出、染色質(zhì)變集和凋亡小體形成，凋亡細(xì)胞陽性率7．5％， 與對(duì)照細(xì)胞比較差異有極顯著性意義（P＜0刀1）。MTT 比色法結(jié)果顯示 M3SPZ－PTEN對(duì)表皮生長(zhǎng)因子（EGF）的敏感性下降，細(xì)胞存活率下降了 19．6o～31．3O，與對(duì)照細(xì)胞比較差別有極顯著性意義（＜0．01入PCR上LISA 法檢測(cè)出M3SPZ．PllW細(xì)胞端粒酶活性抑制率為20石％，差別有顯著性意義u ＜0．0 5）。免疫組化結(jié)果顯示，M3SPZ－PTEN細(xì)胞增殖核抗原 PCNA表達(dá)減弱， 表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR表達(dá)減弱，細(xì)胞周期蛋白抑制劑P57蛋白表達(dá)增強(qiáng)， 細(xì)胞周期依賴激酶cdk4表達(dá)減弱，抗凋亡基因Be12蛋白表達(dá)減弱，癌基因 C－mW和H1as蛋白表達(dá)減弱，抑癌基因P16和P53蛋白表達(dá)增強(qiáng)。 4．PlliN抑癌基因?qū)Ω咿D(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞粘附、遷移侵襲和轉(zhuǎn)移 特性的影響 體外粘附試驗(yàn)顯示M3SPZ－PIEN細(xì)胞在Metrigel和Fn基質(zhì)上 粘附 lh 時(shí)的粘附抑制率分別為 34．3％和49．4％。體外遷移試驗(yàn)顯示 M3SPZITEN細(xì)胞在Matrigel基質(zhì)上的移動(dòng)抑制率為26刀％。體外侵襲實(shí)驗(yàn)顯 第口旱巴大學(xué)悍士學(xué)位論文．4－ 示 M3SPZI皿 細(xì)胞侵襲抑制率為 31．4o。明膠電泳法檢測(cè)結(jié)果表明 M3SPZ－PTEN細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶WP－2和MMP－9活性降低。免疫組化染色顯 示M3SPZ－PTEN細(xì)胞粘附分子CD44V6表達(dá)減弱、WP－2表達(dá)減弱、轉(zhuǎn)移抑制 基因nln23－HI蛋白表達(dá)增強(qiáng)。 5．PTEN抑癌基因?qū)Ω咿D(zhuǎn)移性粘液表皮樣癌細(xì)胞藥物和輻射敏感性的影 響 Mh’比色法結(jié)果表明M3SPZP刪細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物甲氨蝶吟eTX）、 重組人干擾素r＊FN4入絲裂霉素歸MCX多西環(huán)素（DOXy和平陽霉素（PYM 的敏感性增加了1石～521 倍。MTT 比色法和平皿克隆形成試驗(yàn)結(jié)果表明 M3SPZ－PTEN細(xì)胞對(duì) Y－射線的敏感性也增加，放射生物學(xué)參數(shù)％減小 49．6％， 輻射平均致死劑量DO減小41．7％，增敏比 SER為 1．72，DW們?yōu)?1石5。 6．D。刀聯(lián)合PTEN基因轉(zhuǎn)染對(duì)高轉(zhuǎn)移性粘液表皮癌細(xì)胞系的影響 My比色法結(jié)果表明M3SPZF 細(xì)胞對(duì)D。Xy的敏感性增加了1石5～4．75 倍。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示DOXy聯(lián)合PTEN基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞＊期停滯最明顯。 體外粘附、遷移和侵襲試驗(yàn)結(jié)果表明，聯(lián)合用藥組細(xì)胞在vetugel或rn基質(zhì) 表面
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 金軍,唐文杰,張菊,張盈華;阿霉素誘導(dǎo)人粘液表皮樣癌細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年01期

2 吳軍正,司徒鎮(zhèn)強(qiáng),劉志斌,陳建元,李峰,劉斌,李焰,閻曉光;涎腺粘液表皮樣癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞克隆的篩選及其生物學(xué)特性[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1998年01期

3 宋琦,李萍,謝文揚(yáng),徐鋒;涎腺粘液表皮樣癌c-erbB-2和nm23癌基因表達(dá)的研究[J];貴州醫(yī)藥;1998年04期

4 毛祖彝,高志,徐平平,左暉,何永文;實(shí)驗(yàn)性口腔癌變模型中端粒酶的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2000年01期

5 劉斌,司徒鎮(zhèn)強(qiáng),吳軍正,陳建元;HMBA對(duì)粘液表皮樣癌P53蛋白表達(dá)和細(xì)胞增殖周期的影響[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;1999年01期

6 劉勇;腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的規(guī)律及其藥物防治策略[J];江西科學(xué);1998年04期

7 吳軍正;司徒鎮(zhèn)強(qiáng);陳建元;王為;劉斌;;補(bǔ)骨脂素聯(lián)合α_1干擾素治療粘液表皮樣癌的實(shí)驗(yàn)研究[J];口腔醫(yī)學(xué);1992年03期

8 朱聲榮,王秀麗,邵樂南,陳衛(wèi)民,陳新明,吳慧華;rasp_(21)癌基因在涎腺腫瘤中表達(dá)的定量研究[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;1999年04期

9 盧敏華,杜衛(wèi)東,魏維,王春華;p53、C-erbB-2癌基因蛋白在涎腺粘液表皮樣癌中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[J];上海口腔醫(yī)學(xué);1999年04期

10 司徒鎮(zhèn)強(qiáng),吳軍正,王為,劉斌,陳建元,龔民族;人粘液表皮樣癌細(xì)胞系MEC-1的建立及其生物學(xué)特性[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;1990年02期

本文編號(hào)：2791075