【摘要】：目的：通過采集中國廣西慢性牙周炎、慢性齦炎和牙周健康人群齦溝液,檢測伴放線放線桿菌(A.a)、牙齦卟啉單胞菌(P.g)、福賽斯坦納菌(T.f)、中間普氏菌(P.i)、齒垢密螺旋體(T.d)及總菌的含量和hBD-2濃度,探討齦溝液環(huán)境中各致病菌分布情況及防御素hBD-2表達水平,并結(jié)合牙周病患者臨床特征研究其相互關(guān)系。 方法：納入2012年6月至2012年11月在廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院牙周黏膜科確診的慢性齦炎42例,慢性牙周炎95例作為實驗組(PD為4mm,5～6mm,≥7mm分別為28、34、33例)；牙周健康32例作為對照組。收集納入對象的齦溝液采用ELISA檢測hBD-2濃度、BCA法檢測總蛋白濃度及染料熒光定量PCR對A.a、P.g、T.f、P.i、T.d和總菌進行定量分析,所得數(shù)據(jù)使用spss16.0軟件分析,根據(jù)數(shù)據(jù)類型采用方差分析或Wilcoxon秩和檢驗比較各組間hBD-2、總蛋白濃度和比值的差別及各牙周致病菌含量的差異,采用Pearson或Spearman秩相關(guān)分析防御素、總蛋白濃度、牙周致病菌與臨床檢查PD、BI、CAL的相關(guān)性、防御素與牙周致病菌的相關(guān)性等。 結(jié)果：1、采用16Sr RNA熒光定量PCR方法對95例慢性牙周炎、42例慢性齦炎和32例牙周健康者齦下菌斑樣本檢測發(fā)現(xiàn)(溶解曲線出現(xiàn)明顯雙峰或循環(huán)次數(shù)(Ct)大于30,定義為檢出陰性),總菌檢出率均為100%,慢性牙周炎組齦下菌斑中A.a、P.g、T.f、T.d檢出率(73.7%、90.5%、96.8%、93.7%)均高于慢性齦炎組(21.4%、73.8%、59.5%、47.6%),健康組最低(12.5%、65.6%、9.4%、12.5%),行×列表χ2檢驗差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=86.150、12.207、92.531、80.549,P0.05)。P.i檢出率在三組中為88.4～95.2%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。采用實時熒光定量PCR,構(gòu)建含有靶基因的重組質(zhì)粒作為標準品,對樣本中五種主要牙周致病菌和總菌量進行定量檢測,并獲得各菌在齦下菌斑中的比例。慢性牙周炎組總菌的數(shù)量、A.a、P.g、T.f、T.d、P.i負荷及占總菌比值均明顯高于牙周健康對照組,R.g、T.f、T.d和總菌數(shù)量慢性齦炎亦明顯高于健康對照組(P0.05),而A.a、P.i的數(shù)量和占總菌的比值在慢性齦炎組和健康對照組無差異(P0.05)。P.g、T.f、T.d數(shù)量在PD≥7mm時高于PD=4mm,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。P.g占總菌比值在PD≥7mm慢性牙周炎組高于其他組(P=0.045, P=0.004)。A.a.P.i和總菌數(shù)量,A.a、P.i、T.f、T.d占總菌的比值均在不同探診深度牙周炎組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。提示齦下菌斑A.a、P.g、T.f、P.i、T.d和總菌的數(shù)量水平與牙周狀況有密切關(guān)系,尤以P.g、 T.f、T.d負荷在牙周炎癥的進展和加重上存在密切關(guān)系。 2、A.a、P.g、T.f、P.i、T.d和總菌的數(shù)量均與PD呈正相關(guān)(r=0.516、0.529、0.761、0.488、0.429、0.568,P0001),P.g、T.f、P.i、T.d和總菌與BI呈正相關(guān)(r=0.501、0.628、0.314、0.337、0.477,P0.001),A.a數(shù)量與BI無相關(guān)性(r=0.067,P=0.550)同時P.g、T.f、T.d和總菌與CAL均呈正相關(guān)性(r=0.288、0.251、0.289、0.301,P0.05)。提示P.g、T.f、T.d和總菌數(shù)量增加,與牙周炎破壞程度有密切關(guān)系。 3、慢性牙周炎組、慢性齦炎和牙周健康對照組450μLPBS稀釋后的齦溝液中hBD-2濃度均數(shù)分別為344.27±180.57pg/ml、529.38±211.40pg/ml、103.51±58.63pg/ml;總蛋白濃度均數(shù)分別373.14±222.45μg/ml、199.81±168.24μg/ml、44.82±23.98μg/ml, hBD-2和總蛋白濃度在慢性牙周炎組、慢性齦炎組均高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。PD與齦溝液中hBD-2、總蛋白濃度呈正相關(guān)性(r=0.295、r=0.415P0.001),BI與齦溝液中hBD-2、總蛋白濃度呈正相關(guān)性(r=0.651、r=0.689P0.001),PD、BI與hBD-2/總蛋白比值呈負相關(guān)性(r=-0.248P=0.016；r=-0.227P=0.028),但CAL與三者相關(guān)性均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 4、Pg、T.f和總菌與hBD-2呈正相關(guān)(r=0.239、0.175、0.312,P0.05),A.a、P.g、T.f、P.i、T.d和總菌均與總蛋白濃度呈正相關(guān)性(r=0.302、0.571、0.291、0.684、0.262、0.561,P0.05)。提示齦溝液中總蛋白受各主要牙周致病菌的誘導(dǎo)表達,其中P.g、T.f和總菌亦能誘導(dǎo)hBD-2上調(diào)表達。 結(jié)論：1、慢性牙周炎組P.g、T.f、T.d、P.i、A.a無論負荷、與總菌的比例均明顯高于健康對照組,說明該五種細菌在牙周組織從健康到疾病發(fā)展中起重要作用。同時隨著P.g、T.f、T.d負荷的增加,牙周探診深度、臨床附著喪失和出血指數(shù)均加重,提示該三種細菌與牙周炎破壞程度、疾病活動性有密切關(guān)系。 2、主要牙周致病菌P.g、T.f、P.i、T.d.A.a和總菌均能誘導(dǎo)齦溝液總蛋白的上調(diào)表達,P.g.T.f和總菌誘導(dǎo)hBD-2蛋白上調(diào)表達。牙周病齦溝液中總蛋白和hBD-2蛋白表達水平顯著高于健康對照組,可推斷主要牙周致病菌可能是其主要的誘導(dǎo)因素。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R781.42

【參考文獻】

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本文編號：2787413