發(fā)布時間：2020-08-06 11:35

【摘要】：[目的]觀察SD乳鼠下頜髁突軟骨細(xì)胞(Mandibular Condylar Chond-rocytes,MCCs)在280mT靜磁場作用下,其軟骨分化過程中Ⅱ型膠原、IHH、X型膠原及Sox9、Runx2的表達(dá)變化,以說明靜磁場對髁突軟骨分化過程的影響,為深入探討靜磁場對頜面部軟骨生長發(fā)育的影響及磁生物學(xué)效應(yīng)的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。[方法]取出生2-3天SD乳鼠的下頜髁突軟骨,培養(yǎng)原代髁突軟骨細(xì)胞,純化細(xì)胞并傳代。將細(xì)胞分為空白組(MCC)和磁場組(SMC),SMC組加載280mT靜磁場。采用Ⅱ型膠原免疫組化染色、甲苯胺藍(lán)染色鑒定兩組髁突軟骨細(xì)胞,后將其培養(yǎng)至第3、8、15天,在掃描電鏡下觀察髁突軟骨細(xì)胞表面超微形態(tài)結(jié)構(gòu)。用RT-qPCR法檢測靜磁場對髁突軟骨細(xì)胞在第3、8、15天Ⅱ型膠原、IHH、X型膠原mRNA表達(dá)的影響;用蛋白質(zhì)印跡法檢測加載靜磁場后軟骨細(xì)胞在第3、8、15天Sox9、Runx2蛋白的表達(dá)變化。[結(jié)果]1.空白組和磁場組髁突軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原免疫組化染色和甲苯胺藍(lán)染色鑒定結(jié)果均為陽性。2.在掃描電鏡下觀察到,隨著培養(yǎng)時間增加,磁場組髁突軟骨細(xì)胞表面的顆粒狀、疤樣、纖維條索狀結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞間連接均較空白組增加。3.兩組髁突軟骨細(xì)胞培養(yǎng)第3-8天,細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅱ型膠原大量分泌,而IHH、X型膠原合成較少,Sox9高表達(dá);第8-15天,IHH和X型膠原大量分泌,Ⅱ型膠原合成減少,Runx2高表達(dá)。磁場組髁突軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原、IHH、X型膠原及調(diào)控因子Sox9、Runx2的表達(dá)變化趨勢與空白組基本一致,并且在相同時間點(diǎn),磁場組的表達(dá)量均高于空白組,差異具顯著性。[結(jié)論]1.在靜磁場作用下,髁突軟骨細(xì)胞表面的超微形態(tài)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生一定變化,說明靜磁場可引起髁突軟骨細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化。2.在加載靜磁場后第3-8天,髁突軟骨細(xì)胞大量合成Ⅱ型膠原,細(xì)胞處于分化早期階段,靜磁場主要促進(jìn)Ⅱ型膠原、Sox9的表達(dá);第8-15天,IHH與X型膠原大量分泌,髁突軟骨細(xì)胞進(jìn)入肥大階段,靜磁場主要促進(jìn)IHH、X型膠原及Runx2的表達(dá)。3.靜磁場能促進(jìn)髁突軟骨細(xì)胞特異性基質(zhì)分泌,促進(jìn)軟骨細(xì)胞的分化。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R782.6
【圖文】：

永磁體靜磁場加載裝置（力田磁電科技有限公司，中國）逡逑高斯計(jì)（上海亨通ＨＴ２０，中國）逡逑本實(shí)驗(yàn)采用的永磁體靜磁場加載裝置（圖１）由加載平臺、安裝座、永磁體逡逑１０逡逑

兩組細(xì)胞在相同條件下繼續(xù)培養(yǎng)，以后隔日更換培養(yǎng)液。逡逑圖２邋ＳＤ乳鼠髁突軟骨細(xì)胞的取材、分離逡逑（圖２ａ：實(shí)驗(yàn)動物，出生２－３天的ＳＤ乳鼠；ｂ：箭頭所指為分離逡逑解剖出的髁突軟骨）逡逑２．２邋ＳＤ乳鼠髁突軟骨細(xì)胞鑒定逡逑２．２．１邋ＩＩ型膠原免疫組織化學(xué)染色逡逑傳一代后，調(diào)整髁突軟骨細(xì)胞懸液的密度為４Ｘ１０４個／ｍｌ，吸�。欤恚鞈乙航渝义戏N在預(yù)置于培養(yǎng)皿中央的無菌載玻片上，在３７°Ｃ恒溫、５％Ｃ０２飽和濕度培養(yǎng)箱逡逑內(nèi)孵育。待細(xì)胞生長至５０％？６０％，取出載玻片，ＰＢＳ浸洗兩次，４％多聚甲醛逡逑固定１小時，ＰＢＳ沖洗３次。０．４％的Ｔｒｉｔｏｎ邋Ｘ－１００浸泡３０分鐘后ＰＢＳ沖洗３逡逑次，每次３分鐘；新鮮配制的３％過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶１５分鐘；ＰＢＳ逡逑沖洗３次，每次３分鐘；３７°Ｃ１０％正常山羊血清封閉３０分鐘；滴加兔抗小鼠ＩＩ逡逑型膠原抗體，４°Ｃ過夜；３７°Ｃ復(fù)溫１小時，ＰＢＳ沖洗３次，每次３分鐘；辣根過逡逑氧化物酶標(biāo)記抗兔二抗

邐Ｊｂ＿逡逑圖４邋ＳＤ乳鼠髁突軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色鑒定結(jié)果（Ｘ邋１００）逡逑（圖４ａ：邋ＭＣＣ甲苯胺藍(lán)染色；ｂ：ＳＭＣ甲苯胺藍(lán)染色）逡逑２加載靜磁場后ＭＣＣｓ胞體表面超微形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化逡逑在掃描電鏡下觀察髁突軟骨細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)靜磁場作用第３天，細(xì)胞多呈短梭形逡逑或多邊形，直徑１０－２０ｕｍ左右，細(xì)胞表面有少量突起，空白組細(xì)胞表面相對光逡逑滑（圖５ａ，ｂ）；第８天細(xì)胞呈類圓形，似蜂窩樣表面的球體，尤其磁場組細(xì)胞體逡逑積飽滿，胞體明顯脹大，胞體表面突起增多，呈凹凸不平小丘狀，周邊出現(xiàn)纖維逡逑網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，排列相對規(guī)則（圖５ｃ，邋ｄ）；第１５天，細(xì)胞表面明顯可見大量的微絨毛逡逑狀、層狀、疤樣結(jié)構(gòu)，更為凹凸不平，表面顆粒狀物質(zhì)減少，并可見纖維狀條索逡逑結(jié)構(gòu)變粗大，不規(guī)則排列（圖５ｅ，邋ｆ）。相同時間點(diǎn)的磁場組髁突軟骨細(xì)胞胞體表逡逑面突起以及細(xì)胞間連接均較空白組細(xì)胞多。逡逑ＢＤ逡逑１５逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馮其帥;高麗娜;崔元璐;;ATDC5:一株反映軟骨形成完整過程的細(xì)胞系[J];天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2015年06期

2 Xin Li;Zi-Xin Wang;Zi-Sheng Wang;Quan-Fang Li;;Effect of microRNA-101 on apoptosis of rabbit condylar cartilage cells by inhibiting target gene SOX9[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年06期

3 張靜;詹琪;黃艷;;磁場對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的影響[J];中國組織工程研究;2015年23期

4 王林林;董玉珍;;兔軟骨細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年04期

5 蔣萍;蔚們;趙明才;陳瓊;王梓;;Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白對人軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];中國組織工程研究;2014年30期

6 譚利;許艷華;李思佳;李艦;劉春雷;;FLRT家族研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年09期

7 唐君儀;周冠楠;謝志芳;;轉(zhuǎn)錄因子Sox9調(diào)控軟骨發(fā)育的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年09期

8 張淵岫;李強(qiáng);王震東;許衍;邵勝;李琥;馬俊青;胡佳藝;尹璐;陳文靜;;RUNX蛋白在不同發(fā)育時期小鼠髁狀突中的表達(dá)[J];口腔生物醫(yī)學(xué);2013年01期

9 邱飛遠(yuǎn);何學(xué)令;姚曉琳;李凱;況薇;吳文超;李良;;低頻脈沖電磁場誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨樣細(xì)胞分化[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2012年03期

10 金紹林;周云;;磁場在現(xiàn)代骨科領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2011年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王麗艷;靜磁場在口腔正畸臨床中的應(yīng)用以及對面領(lǐng)骨骼肌細(xì)胞生物安全性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 王彥蒽;PEMF聯(lián)合BMP9對牙周膜干細(xì)胞增殖和成骨分化的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

2 寸鏡芬;靜磁場對SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞軟骨形成的影響研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2017年

3 曹航;Runx對梅花鹿茸角軟骨細(xì)胞分化的調(diào)控[D];吉林大學(xué);2015年

4 張建麗;靜磁場對SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：2782336