【摘要】： 目的: 用優(yōu)化劑量的脈沖Nd:YAG激光照射牙髓斷面后,動(dòng)態(tài)觀察牙髓組織中熱休克蛋白70 (HSP70)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 (TGF-β1)和骨形成蛋白2 (BMP-2 )在不同時(shí)間段和部位的表達(dá)情況,并用透射電鏡觀察組織變化,分析各觀察指標(biāo)在損傷防御和自我修復(fù)過(guò)程中的生物學(xué)意義,進(jìn)一步探討牙髓組織經(jīng)激光照射后的損傷修復(fù)機(jī)制。 方法: 1.脈沖Nd:YAG激光照射牙髓斷面優(yōu)化劑量的篩選:健康本地雜種犬4只(1-4號(hào)犬),選用每只犬的前磨牙、磨牙為實(shí)驗(yàn)牙。 對(duì)照組A組:5×4個(gè)牙(每只犬左上3個(gè)前磨牙,2個(gè)磨牙); 激光照射組分3個(gè)不同的照射條件: B組5×4牙(每只犬左下3個(gè)前磨牙,2個(gè)磨牙) :40 Hz、50 mJ、2 W、5 s ; C組5×4牙(每只犬右上3個(gè)前磨牙,2個(gè)磨牙) :40 Hz、50 mJ、2 W、10 s ; D組5×4牙(每只犬右下3個(gè)前磨牙,2個(gè)磨牙) :60 Hz、50 mJ、3 W、5 s。 3種參數(shù)的激光照射牙髓斷面,并在3 d、15 d、25 d和45 d 4個(gè)時(shí)間段將犬處死,即刻取下所有的實(shí)驗(yàn)牙,固定、脫鈣、包埋、常規(guī)切片、HE染色。參照牙髓組織學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),篩選優(yōu)化劑量的脈沖Nd:YAG激光技術(shù)參數(shù)。 2.優(yōu)化劑量脈沖Nd:YAG激光照射犬牙髓斷面后牙髓的病理學(xué)觀察:使用成年健康雜種犬4只(雄性),體重10 kg～16 kg ,牙齒和尖周發(fā)育完全,無(wú)損壞及牙周病。選用每只犬的前磨牙、磨牙為實(shí)驗(yàn)牙,共96個(gè)(其中80個(gè)HE染色和免疫組化,16個(gè)透射電鏡)。 對(duì)照組(A_1組、A_2組、A_3組、A_4組):12 (12×4)個(gè)牙(每只犬左側(cè)上、下頜3個(gè)前磨牙、3個(gè)磨牙)。 激光照射組: B組12個(gè)牙(1號(hào)犬右側(cè)上、下頜3個(gè)前磨牙、3個(gè)磨牙):術(shù)后3 d處死; C組12個(gè)牙(2號(hào)犬右側(cè)上、下頜3個(gè)前磨牙、3個(gè)磨牙):術(shù)后15 d處死; D組12個(gè)牙(3號(hào)犬右側(cè)上、下頜3個(gè)前磨牙、3個(gè)磨牙):術(shù)后21 d處死; E組12個(gè)牙(4號(hào)犬右側(cè)上、下頜3個(gè)前磨牙、3個(gè)磨牙):術(shù)后45 d處死。 激光照射組的照射條件: 40 Hz、50 mJ、2 W、5 s。激光由光導(dǎo)纖維傳遞,光軸與牙面垂直,纖維尖端距照射面2 mm ,光斑直徑2 mm。術(shù)后3 d、15 d、21 d、45 d分別處死,取上下頜骨,分離各實(shí)驗(yàn)牙,于根尖1/3處橫斷,固定、脫鈣、包埋、常規(guī)切片,進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)分析。在每組中隨機(jī)抽取劈開(kāi)右側(cè)2個(gè)上頜前磨牙,取出牙髓經(jīng)固定后切片,進(jìn)行透射電鏡觀察。應(yīng)用Image- Pro Plus 5.0圖像分析處理軟件測(cè)得免疫組化圖像的平均OD值,所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,秩和檢驗(yàn)Kruskal-Wallis法、Nemenyi法以及完全隨機(jī)設(shè)計(jì)單因素方差分析(One-way ANOVA)和LSD-t檢驗(yàn)。 觀測(cè)優(yōu)化脈沖Nd:YAG激光照射牙髓斷面后牙髓組織在不同時(shí)間的動(dòng)態(tài)病理變化以及微觀狀態(tài)下的變化; 觀測(cè)牙髓中HSP70、TGF-β_1和BMP-2在不同時(shí)間和部位的表達(dá)情況的動(dòng)態(tài)變化;探討牙髓在熱損傷后的防御和自我修復(fù)機(jī)制,以及三種因子在防御和自我修復(fù)過(guò)程中的作用機(jī)制。 結(jié)果: 1.實(shí)驗(yàn)組B組40 Hz、50 mJ、5 s的脈沖Nd:YAG激光不但能凝固、炭化根髓斷面組織,起充分的止血作用,而且還具有抗炎,促進(jìn)牙本質(zhì)橋形成和牙髓組織修復(fù)愈合的作用。術(shù)后早期,創(chuàng)傷牙髓的愈合優(yōu)于對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0. 05);術(shù)后15 d、21 d及45 d有程度不同的牙本質(zhì)橋形成,根部牙髓無(wú)明顯異常,組織學(xué)療效評(píng)價(jià)均為成功,表明在此條件Nd:YAG激光在一定程度上有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合作用。但在D組60 HZ、50 mJ輸出能量3 W條件下,根髓卻存在成牙本質(zhì)細(xì)胞排列紊亂變性、血管擴(kuò)張充血及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等,治療成功率僅有20%左右,提示:大能量Nd:YAG激光照射牙髓具有較強(qiáng)的損傷作用。 2.脈沖Nd:YAG激光照射后HE染色結(jié)果:從最初的牙髓充血、水腫,成牙本質(zhì)細(xì)胞空泡性變,至炎細(xì)胞浸潤(rùn),最后的修復(fù)性牙本質(zhì)形成,可直觀地看到牙髓可逆性的損傷修復(fù)過(guò)程。 成牙本質(zhì)細(xì)胞空泡性變和牙髓血管充血和出血情況的數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后得出:B組和A_1、A_4、D組、E組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),B組和C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況在B組達(dá)最高峰,至45 d時(shí)牙髓恢復(fù)正常。E組中可見(jiàn)部分第三期牙本質(zhì)形成。 透射電鏡顯示:B組和C組:成牙本質(zhì)細(xì)胞核周間隙輕度擴(kuò)張,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中度擴(kuò)張,有的呈囊泡狀,并有脫顆�，F(xiàn)象,部分線粒體峭和基質(zhì)出現(xiàn)降解。吞噬細(xì)胞胞體大,多突起,細(xì)胞器豐富,富有大量溶酶體顆粒和大量吞噬泡。提示:牙髓對(duì)于激光造成的損傷具備自我防御能力。D組和E組:電鏡下形態(tài)和A2、A3、A4組相似,成牙本質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)豐富,富有粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、線粒體,核上區(qū)有發(fā)育良好的高爾基復(fù)合體區(qū),含多層扁平囊、大泡、小泡。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)帶狀,核糖體都很豐富,線粒體卵圓形,板層狀嵴。提示:牙髓細(xì)胞出現(xiàn)增生。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:所用優(yōu)化激光劑量照射牙髓斷面后牙髓發(fā)生可逆的損傷修復(fù)過(guò)程。 3.HSP70、TGF-β_1、BMP-2分別在照射后3 d、21 d和45 d表達(dá)最強(qiáng),與其余各時(shí)間段的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 HSP70在激光照射牙髓后,在早期達(dá)高峰,而后逐漸恢復(fù)至照射前水平,但在照射后45 d反低于對(duì)照組(P0.05)。定量分析表明,各小組間HSP70表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 TGF-β_1在激光照射牙髓后一度上升, 21 d達(dá)高峰,45 d時(shí)下降,但仍高于對(duì)照組。定量分析表明,各組間TGF-β_1表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。BMP-2在激光照射牙髓后3 d內(nèi)表達(dá)未見(jiàn)明顯變化(P0.05),照射后21 d和45 d時(shí)表達(dá)均上升(P0.05)。定量分析表明,各組BMP-2表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: ①實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:小劑量Nd:YAG激光有促進(jìn)創(chuàng)傷早期愈合作用;大能量Nd : YAG激光有較強(qiáng)的損傷作用;一定能量范圍內(nèi)激光對(duì)牙髓的損傷程度多少與激光的照射時(shí)間有關(guān)。篩選出優(yōu)化激光劑量:每脈沖內(nèi)發(fā)射時(shí)間為0.05 s,間歇時(shí)間0.3 s,光斑大小為2 mm,掃描照射5 s,其平均功率2 W,40 Hz,50 mJ。 ②用優(yōu)化激光劑量脈沖Nd:YAG激光照射后牙髓發(fā)生可逆的損傷修復(fù)過(guò)程。 ③超微結(jié)構(gòu)的變化提示牙髓具有自我防御功能。 ④實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示: HSP70在激光照射后受到熱刺激特異性出現(xiàn),在強(qiáng)效誘導(dǎo)劑一多種炎性遞質(zhì)的作用下,在早期強(qiáng)效表達(dá),限制炎癥發(fā)展,保護(hù)損傷的牙髓。在損傷晚期則可能參與牙齒礦化修復(fù)過(guò)程提示:HSP70在后期對(duì)牙髓的修復(fù)起作用。 ⑤TGF-β_1和BMP-2在正常牙髓和損傷的牙髓中存在,表達(dá)情況的動(dòng)態(tài)變化提示:在損傷早期起防御作用,后期參與牙髓的自我修復(fù)過(guò)程,并促進(jìn)修復(fù)性牙本質(zhì)的形成。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R781.05
【圖文】：

組45d牙本質(zhì)橋形成

組15d牙本質(zhì)橋形成HE×200HE×100

組45d牙本質(zhì)橋形成

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本文編號(hào)：2773290