【摘要】：腫瘤如何轉(zhuǎn)移一直以來(lái)都是生物醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。隨著人類腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因陸續(xù)被克隆,腫瘤的傳統(tǒng)檢測(cè)方法(免疫組織化學(xué)和組織病理切片)已不能快速檢測(cè)這些基因的活體功能,也不能針對(duì)疾病靶標(biāo)的藥物療效進(jìn)行有效的評(píng)估。近年來(lái),分子成像技術(shù)的發(fā)展以及小動(dòng)物模型的廣泛應(yīng)用,使得對(duì)活體動(dòng)物內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程進(jìn)行非侵入性成像成為現(xiàn)實(shí)。 光學(xué)成像方法可在細(xì)胞和分子水平對(duì)活體內(nèi)的生理和病理過(guò)程進(jìn)行定性或定量可視化觀察。該方法相對(duì)于其它分子成像方法而言具有明顯的優(yōu)勢(shì):非電離低能量照射、高靈敏度、實(shí)時(shí)、非侵入性、無(wú)需放射試劑以及成像系統(tǒng)費(fèi)用低。本文采用光學(xué)成像技術(shù)進(jìn)行了兩方面研究:一方面利用實(shí)驗(yàn)室已建立的整體光學(xué)成像系統(tǒng),監(jiān)測(cè)裸鼠體內(nèi)熒光標(biāo)記的腫瘤的早期轉(zhuǎn)移、生長(zhǎng)以及治療,同時(shí)也檢測(cè)了裸鼠體內(nèi)熒光標(biāo)記的微生物感染及治療; 另一方面在細(xì)胞水平上,采用熒光標(biāo)記技術(shù)同熒光顯微鏡結(jié)合對(duì)HSV-tk/ACV系統(tǒng)誘導(dǎo)ACC-M腫瘤細(xì)胞的凋亡模型進(jìn)行了研究。本文主要研究?jī)?nèi)容如下: 首先采用梭華試劑把pEGFP-C1轉(zhuǎn)染到人涎腺腫瘤細(xì)胞,G418篩選出穩(wěn)定高表達(dá)綠色熒光蛋白GFP的人涎腺癌細(xì)胞株(ACC-M-GFP),在5只雌性裸鼠上采用頜下腺注射ACC-M-GFP細(xì)胞,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室已建立的整體光學(xué)成像系統(tǒng)觀察到ACC-M-GFP腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到肺部、骨骼和膀胱,而在另5只雌性裸鼠上采用尾靜脈注射ACC-M-GFP腫瘤細(xì)胞,觀察到ACC-M-GFP腫瘤細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到肺部、肌肉、膀胱及骨骼; 同時(shí)將轉(zhuǎn)移組織取出制作了病理切片,結(jié)果證明腫瘤細(xì)胞發(fā)生了轉(zhuǎn)移。因此,這種光學(xué)成像技術(shù)揭示了ACC-M的多器官轉(zhuǎn)移屬性。另外利用篩選的ACC-M-GFP細(xì)胞株,建立了GFP標(biāo)記腫瘤的皮下腫瘤生長(zhǎng)治療模型,并對(duì)模型進(jìn)行了整體熒光成像的初步研究; 同時(shí)也進(jìn)行了表達(dá)紅色熒光蛋白(DsRed)細(xì)菌的腹部感染及抗生素卡那霉素治療模型的光學(xué)成像。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明光學(xué)成像
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R739.8;R310
【圖文】：

轉(zhuǎn)移模型示意圖見(jiàn)圖1-1。實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)移模型又分為誘發(fā)性腫瘤模型和移植性腫瘤模型兩種類型。1）自發(fā)性腫瘤模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群中不經(jīng)人為的實(shí)驗(yàn)處理而自然發(fā)生的一類腫瘤，稱為自發(fā)性腫瘤。自發(fā)轉(zhuǎn)移是將腫瘤細(xì)胞或腫瘤小塊移植到動(dòng)物體的某個(gè)部位（足墊、皮下、腹腔和原位組織），形成原發(fā)癌，并形成轉(zhuǎn)移灶的過(guò)程。該模型基本模擬了腫瘤轉(zhuǎn)移的全過(guò)程：腫瘤細(xì)胞脫落、血道或淋巴道轉(zhuǎn)運(yùn)、著床和轉(zhuǎn)移灶的新生血管形成四個(gè)階段[32]，適用于腫瘤轉(zhuǎn)移的全過(guò)程研究。①皮下接種：操作簡(jiǎn)單，腫瘤表淺，便于觀察，潛伏期短，腫瘤生長(zhǎng)速度較快，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移發(fā)生少，與在人體的表現(xiàn)不一致。②腹(胸) 腔移植：位置深，不易觀察和測(cè)定，但操作簡(jiǎn)單，可出現(xiàn)一定比例的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和腹水。在缺乏技術(shù)條件的情況下，比皮下移植要好。腹腔移植形成的腫瘤侵襲廣泛，可達(dá)腹壁和腹腔器官。③原位移植：將人類腫瘤移植于動(dòng)物相應(yīng)器官，如人的肝癌移植到裸鼠肝葉上。人腫瘤轉(zhuǎn)移模型的原位移植方法

leder[44]于 1999 年提出了分子成像的概念：活體狀態(tài)下在細(xì)胞學(xué)對(duì)生物過(guò)程進(jìn)行定性和定量研究。與一般的臨床影像比較的分子異常，而不是這些分子改變的最終結(jié)果的成像，即從疾病，闡明病變組織生物過(guò)程的變化、病變細(xì)胞基因表達(dá)、細(xì)胞是否存活以及細(xì)胞內(nèi)生物活動(dòng)的狀態(tài)等，為臨床早期診究提供分子水平信息。分子成像就是以圖像的形式從分子水織結(jié)構(gòu)與功能變化信息的影像。新成像技術(shù)的發(fā)展需要多學(xué)、化學(xué)家、物理學(xué)家和影像科學(xué)家一起來(lái)發(fā)明新的分子探針（號(hào)放大策略和成像技術(shù)。目前分子成像技術(shù)主要包括[45]：放 和 SPECT）、磁共振成像（MRI）以及光學(xué)成像（optical ima體基因表達(dá)進(jìn)行評(píng)估。21 世紀(jì)，影像醫(yī)學(xué)的發(fā)展將從解剖學(xué)，逐步走向分子影像時(shí)期。

腫瘤光學(xué)分子成像瘤光學(xué)成像可追溯到 1924 年，當(dāng)時(shí)有學(xué)者提出利用自發(fā)熒光可對(duì)腫瘤進(jìn)行65年Lycette[53]等通過(guò)定量熒光術(shù)區(qū)分正常組織和癌變組織。20世紀(jì)80年代Alfa體外測(cè)量了正常組織和癌組織的熒光光譜。此后隨著高靈敏的光學(xué)信號(hào)探測(cè)器冷/增強(qiáng)型電荷耦合器件（cooled/intensified charge coupled device，CCCD/ICCD倍增管（photo multiplier tube，PMT），使得對(duì)于微弱光學(xué)信號(hào)檢測(cè)成為可能。光學(xué)成像主要包括共聚焦成像（confocal imaging）[55]、多光子成像（multiphotg）[56]、活體顯微鏡的顯微成像（microscopic imaging by intravital microscopy）[中活體光學(xué)分子成像[58]主要包括生物發(fā)光成像（bioluminescence imaging，BLI成像（fluorescence imaging，F(xiàn)I）兩種。光學(xué)分子成像相對(duì)其它分子成像技術(shù)有優(yōu)點(diǎn)：成本低、無(wú)放射性以及非侵入等。當(dāng)然也存在一些缺點(diǎn)，比如很難定量比較低以及成像深度淺等。下面著重介紹一下 BLI 和 FI 的分子探針和成像原理一下目前 GFP 標(biāo)記的腫瘤熒光成像的應(yīng)用。

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 田恬;李紓;;單分子檢測(cè)技術(shù)及其在人涎腺腫瘤實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2012年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳延平;用于小動(dòng)物模型研究的擴(kuò)散光學(xué)分子成像技術(shù)[D];華中科技大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2756345