【摘要】： 目的：檢測束縛應(yīng)激和牙齦卟啉單胞菌內(nèi)毒素(Pg-LPS)對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO、TNF-α、H_2O_2及IL-Iβ、IL-2、TL-6、IL-10等細(xì)胞因子的影響，了解束縛應(yīng)激和Pg-LPS對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞凋亡情況的影響，初步探討應(yīng)激影響牙周疾病的機(jī)制。 方法：(1)第一部分：采用束縛應(yīng)激方式，將SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為無應(yīng)激組和應(yīng)激組，于應(yīng)激結(jié)束時常規(guī)收集腹腔液，用RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)巨噬細(xì)胞，用貼壁法純化巨噬細(xì)胞，并將細(xì)胞分為四組：正常對照組、Pg-LPS組、應(yīng)激組和應(yīng)激+Pg-LPS組，其中正常對照組和應(yīng)激組用RPMI-1640培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，Pg-LPS組和應(yīng)激+Pg-LPS組用RPMI-1640培養(yǎng)液+1μg／mlPg-LPS繼續(xù)培養(yǎng)，24小時后分別收集上清，測定上清液中NO、H_2O_2、TNF-α水平。 (2)第二部分：采用束縛應(yīng)激方式，將SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為無應(yīng)激組、1天應(yīng)激組及12天應(yīng)激組，于應(yīng)激結(jié)束時常規(guī)收集腹腔液，巨噬細(xì)胞培養(yǎng)及純化等步驟同第一部分，細(xì)胞分為無應(yīng)激組、1天應(yīng)激組及12天應(yīng)激組，均用RPMI-1640培養(yǎng)液+1μg／ml Pg-LPS繼續(xù)培養(yǎng)，24小時后分別收集上清，用Luminex~(100)檢測儀測定上清液中IL-Iβ、IL-2、IL-6、IL-10等的水平。 (3)第三部分：采用束縛應(yīng)激方式，將SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為無應(yīng)激組和應(yīng)激組，于應(yīng)激結(jié)束時處死動物、收集腹腔液、培養(yǎng)及純化巨噬細(xì)胞等步驟同第一部分，巨噬細(xì)胞分為六組，分別繼續(xù)用RPMI-1640培養(yǎng)液，RPMI-1640培養(yǎng)液+0.01μg／mlPg-LPS，RPMT-1640培養(yǎng)液+1μg／mlPg-LPS繼續(xù)培養(yǎng)。于24小時后收集細(xì)胞爬片，采用熒光染色法、原位末端標(biāo)記法(TUNEL)觀察巨噬細(xì)胞的凋亡情況。 結(jié)果：第一部分：應(yīng)激組大鼠體重明顯減輕(p＜0.05)。應(yīng)激組大鼠腹腔巨噬細(xì)胞總量減少(p＜0.05)。Pg-LPS組NO水平比正常對照組顯著增加(p＜0.05)，單純應(yīng)激組H_2O_2水平比正常對照組顯著增加(p＜0.05)，應(yīng)激+Pg-LPS組NO、H_2O_2、TNF-α水平比正常對照組顯著增加(p＜0.05)。 第二部分：1天應(yīng)激組各細(xì)胞因子水平與無應(yīng)激組比較均無顯著差異。12天應(yīng)激組的IL-1β水平比無應(yīng)激組顯著增加(p＜0.05)、IL-6水平比無應(yīng)激組顯著降低(p＜0.05)；IL-2水平比1天應(yīng)激組顯著降低(p＜0.05)。IL-10在各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。 第三部分：無應(yīng)激、1μg／mlPg-LPS組及應(yīng)激、1μg／mlPg-LPS組巨噬細(xì)胞的凋亡率較正常對照組明顯提高(p＜0.05)，應(yīng)激、1μg／mlPg-LPS組巨噬細(xì)胞的凋亡率較無應(yīng)激、1μg／mlPg-LPS明顯提高(p＜0.05)。 結(jié)論：(1)慢性束縛應(yīng)激可引起大鼠體重減輕、腹腔巨噬細(xì)胞總量減少，慢性束縛應(yīng)激和Pg-LPS可引起大鼠腹腔巨噬細(xì)胞所釋放的NO、TNF-α、H_2O_2水平的改變；(2)1μg／mlPg-LPS刺激下，急性應(yīng)激未引起大鼠腹腔巨噬細(xì)胞所釋放的各細(xì)胞因子水平的改變，而慢性束縛應(yīng)激可引起IL-Iβ、IL-2、IL-6等細(xì)胞因子水平的改變。(3)1μg／ml Pg-LPS可誘導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞凋亡，束縛應(yīng)激能加重這種異常。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R781.4
【圖文】：

應(yīng)激組、無/公LPS刺激的巨噬細(xì)胞熒光染色結(jié)果(熒光顯微鏡X400):

無應(yīng)激組、無Z夢LPS刺激的巨噬細(xì)胞熒光染色結(jié)果(熒光顯微鏡x400):

應(yīng)激組、0.01以g/mll公~LPS刺激的巨噬細(xì)胞熒光染色結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2753301