MiR-127-5p-mimic和MiR-99a-inhibitor協(xié)同促進(jìn)脂肪干細(xì)胞成軟骨分化的相關(guān)研究
【學(xué)位授予單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R78
【圖文】:
(3) 在超凈臺(tái)內(nèi)分離肩胛骨下和腹股溝脂肪組織(圖 1-1)。將獲取的脂肪組織浸泡在預(yù)冷的 PBS 里;(4) 去除血管和筋膜組織,PBS 沖洗 3-4 次;(5) 分離成體積大小為 1mm3的組織小塊;(6) 將剪碎的脂肪組織小塊移入含有玻璃球、磁力攪拌器轉(zhuǎn)子、酶消化液(由體積比為 4:4:1:1 的 HG—DMEM、0.25%EDTA 一胰酶消化液、Dispase、Ⅳ膠原酶配制)的玻璃瓶;(7) 磁力攪拌器低轉(zhuǎn)速下,孵箱中旋轉(zhuǎn)消化 30-40min 左右;終止消化后,過濾懸液;(8) 以 1000rpm,5min 離心濾液,收集細(xì)胞,再加入 α- MEM(含 10% FBS)重懸,計(jì)數(shù);(9) 接種,孵箱中常規(guī)培養(yǎng);(10) 24h 后換液,以后隔 2 天換 1 次培養(yǎng)基,細(xì)胞長(zhǎng)滿 80%左右,消化傳代培養(yǎng)。
(1) 從第 1 代開始,將 ADSCs 消化,重懸,計(jì)數(shù);(2) 接種于 6 孔板,密度為 2.5×105個(gè)/孔。培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 3d 后,第 2 代細(xì)胞胰酶消化后使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),每個(gè)樣本取 3 個(gè)孔,計(jì)算均值;(3) 計(jì)數(shù)并離心后重懸細(xì)胞,以相同密度再次接種于 6 孔板為 P3 代,相同方法計(jì)數(shù)并記錄;(4) P4~P9 代細(xì)胞利用上述方法依次進(jìn)行計(jì)數(shù)并記錄。1.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS18.0 軟件分析數(shù)據(jù),結(jié)果用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表達(dá)數(shù)據(jù);進(jìn)行單因素方差分析,或 t 檢驗(yàn)。以雙側(cè) P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié) 果2.1 BADSCs 和 WADSCs 的形態(tài)學(xué)觀察
【相似文獻(xiàn)】
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