不同發(fā)育階段人牙髓組織VEGF及其受體表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間：2020-07-04 16:07
【摘要】： 目的 1.比較劈牙取髓和脫鈣制作牙體-牙髓聯(lián)合切片兩種方法,在牙髓的實(shí)驗(yàn)研究方面的優(yōu)缺點(diǎn)。 2.應(yīng)用免疫組化研究不同發(fā)育階段人牙髓VEGF,Flt-1,Flk-1的表達(dá)及受體的相關(guān)性。 3.應(yīng)用RT-PCR從基因水平研究不同發(fā)育階段人牙髓VEGF、Flt-1、Flk-1的基因表達(dá)及受體的相關(guān)性。 方法 1.制備牙髓組織切片及牙體-牙髓聯(lián)合切片,HE染色。通過制備程序、組織學(xué)觀察等分析兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。 2.選取臨床上因正畸治療需要而拔除的健康前磨牙,分為兩組:Ⅰ根尖孔未閉合,Ⅱ根尖孔完全閉合。采用實(shí)驗(yàn)一篩選的方法制備切片,進(jìn)行VEGF,Flt-1,Flk-1免疫組化染色,通過Image-Pro Plus 6.0和SPSS17.0軟件行分析統(tǒng)計(jì)。 3.提取不同發(fā)育階段人牙髓組織總RNA,采用RT-PCR技術(shù)從基因水平初步探究VEGF及其受體在牙體發(fā)育成熟中的作用機(jī)制,實(shí)驗(yàn)分組及測(cè)定指標(biāo)同2。 結(jié)果 1.劈牙取髓操作簡(jiǎn)便快捷,組織固定、脫水等容易掌握,但不易保證組織完整性,牙髓各部不易區(qū)分,適用于需要新鮮牙髓的實(shí)驗(yàn)研究。脫鈣制作牙體-牙髓聯(lián)合切片工序較繁瑣,脫鈣、組織固定、脫水等不易掌握,但牙髓保存完整,牙髓各部定位明確,適用于牙髓的組織學(xué)觀察研究。 2.通過免疫組織化學(xué)染色觀察,發(fā)現(xiàn)在年輕恒牙中VEGF,Flk-1的表達(dá)高于成熟恒牙且以根尖部最為顯著(P0.05);Flt-1在年輕恒牙中的表達(dá)低于成熟恒牙(P0.05);Flt-1,Flk-1呈顯著負(fù)相關(guān)性表達(dá)(P0.01)。 3.瓊脂糖凝膠電泳顯示:VEGF、Flt-1、Flk-1的mRNA擴(kuò)增對(duì)應(yīng)片段長(zhǎng)度為145bp、169bp、162bp。通過RT-PCR檢測(cè),得出年輕恒牙VEGF及其受體Flt-1、Flk-1的表達(dá)分別是成熟恒牙的1.7倍及0.6倍、1.5倍(P0.05),與免疫組化所得的結(jié)果基本一致。 結(jié)論 1.牙體脫鈣制作牙體-牙髓聯(lián)合切片能較大程度保全牙髓,實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀真實(shí),在需對(duì)牙髓各部分進(jìn)行定性和定量分析研究中值得推薦。 2.VEGF, Flt-1,Flk-1在人正常牙髓組織中,隨著根尖孔的閉合呈現(xiàn)不同特征表達(dá),參與了牙髓的發(fā)育和成熟。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R781.05
【圖文】：
0.01mol/L PH=7.4 磷酸鹽緩沖液 （北京中杉試劑公司，粉劑，ZLI-9063）10%中性福爾馬林（40%甲醛 100ml +蒸餾水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、實(shí)驗(yàn)方法1、標(biāo)本的固定、包埋和切片制作（1）經(jīng)由患者同意，牙體拔除后去盡牙周軟組織，生理鹽水洗凈：Ⅰ組：牙體于無(wú)菌紗布臺(tái)面劈開，探針小心剝離，盡量確保牙髓成條取出。剔凈牙髓上硬組織碎片，PBS 漂洗，10%中性福爾馬林固定 3h。Ⅱ組：離體牙于 10%中性福爾馬林固定 1d，流水沖洗，金剛砂沿牙體外形均勻磨除至透見髓腔形態(tài)，牙薄片厚約 2mm（圖 1a-b）。牙片再固定 1d，流水沖洗，37°C 培養(yǎng)箱中進(jìn)口脫鈣液脫鈣，待牙體軟至擴(kuò)大針可無(wú)阻力穿通時(shí)取出。
0.01mol/L PH=7.4 磷酸鹽緩沖液 （北京中杉試劑公司，粉劑，ZLI-9063）10%中性福爾馬林（40%甲醛 100ml +蒸餾水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、實(shí)驗(yàn)方法1、標(biāo)本的固定、包埋和切片制作（1）經(jīng)由患者同意，牙體拔除后去盡牙周軟組織，生理鹽水洗凈：Ⅰ組：牙體于無(wú)菌紗布臺(tái)面劈開，探針小心剝離，盡量確保牙髓成條取出。剔凈牙髓上硬組織碎片，PBS 漂洗，10%中性福爾馬林固定 3h。Ⅱ組：離體牙于 10%中性福爾馬林固定 1d，流水沖洗，金剛砂沿牙體外形均勻磨除至透見髓腔形態(tài)，牙薄片厚約 2mm（圖 1a-b）。牙片再固定 1d，流水沖洗，37°C 培養(yǎng)箱中進(jìn)口脫鈣液脫鈣，待牙體軟至擴(kuò)大針可無(wú)阻力穿通時(shí)取出。
本文編號(hào)：2741290
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R781.05
【圖文】：
0.01mol/L PH=7.4 磷酸鹽緩沖液 （北京中杉試劑公司，粉劑，ZLI-9063）10%中性福爾馬林（40%甲醛 100ml +蒸餾水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、實(shí)驗(yàn)方法1、標(biāo)本的固定、包埋和切片制作（1）經(jīng)由患者同意，牙體拔除后去盡牙周軟組織，生理鹽水洗凈：Ⅰ組：牙體于無(wú)菌紗布臺(tái)面劈開，探針小心剝離，盡量確保牙髓成條取出。剔凈牙髓上硬組織碎片，PBS 漂洗，10%中性福爾馬林固定 3h。Ⅱ組：離體牙于 10%中性福爾馬林固定 1d，流水沖洗，金剛砂沿牙體外形均勻磨除至透見髓腔形態(tài)，牙薄片厚約 2mm（圖 1a-b）。牙片再固定 1d，流水沖洗，37°C 培養(yǎng)箱中進(jìn)口脫鈣液脫鈣，待牙體軟至擴(kuò)大針可無(wú)阻力穿通時(shí)取出。
0.01mol/L PH=7.4 磷酸鹽緩沖液 （北京中杉試劑公司，粉劑，ZLI-9063）10%中性福爾馬林（40%甲醛 100ml +蒸餾水 900ml+KH2PO44.0g +Na2HPO46.5g）二、實(shí)驗(yàn)方法1、標(biāo)本的固定、包埋和切片制作（1）經(jīng)由患者同意，牙體拔除后去盡牙周軟組織，生理鹽水洗凈：Ⅰ組：牙體于無(wú)菌紗布臺(tái)面劈開，探針小心剝離，盡量確保牙髓成條取出。剔凈牙髓上硬組織碎片，PBS 漂洗，10%中性福爾馬林固定 3h。Ⅱ組：離體牙于 10%中性福爾馬林固定 1d，流水沖洗，金剛砂沿牙體外形均勻磨除至透見髓腔形態(tài)，牙薄片厚約 2mm（圖 1a-b）。牙片再固定 1d，流水沖洗，37°C 培養(yǎng)箱中進(jìn)口脫鈣液脫鈣，待牙體軟至擴(kuò)大針可無(wú)阻力穿通時(shí)取出。
【引證文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前1條
1 關(guān)為群;陳雅瑜;;辛伐他汀對(duì)人正常牙髓細(xì)胞和脂多糖誘導(dǎo)的人牙髓細(xì)胞增殖的影響[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2013年07期
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條
1 陳雅瑜;辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞的體外作用及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年
本文編號(hào)：2741290
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