【摘要】： 目的:半導(dǎo)體量子點(Semiconductor quantum dots,QDs)作為一種新型的納米材料,由于具有獨特的光譜特性和良好的光化學(xué)穩(wěn)定性,它提供了對活細胞成像和對活細胞內(nèi)分子進行長期追蹤觀察研究的可能,但用量子點標記癌細胞后是否影響其生物學(xué)行為是量子點能否用于腫瘤活細胞可視化研究的關(guān)鍵所在。本課題利用半導(dǎo)體量子點[CdSe/ZnS]標記舌鱗癌細胞Tca8113,觀察被量子點標記后的Tca8113細胞其生長、浸潤、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的改變情況,為半導(dǎo)體量子點用于活體腫瘤細胞的實時原位“在線”研究提供依據(jù)。 方法:首先在激光共聚焦顯微鏡(confocal microscopy,CM)下觀察量子點的發(fā)光顏色,發(fā)光強度和形態(tài),將Tca8113細胞接種在24孔培養(yǎng)板內(nèi),細胞貼壁后加入量子點共同培養(yǎng),然后在相差倒置熒光顯微鏡(fluorescence microscope,FM)下觀察量子點進入細胞內(nèi)的情況。將生長旺盛的Tca8113細胞,加入不同高濃度(0.1μMol,1μMol,2μMol)的半導(dǎo)體量子點[CdSe/ZnS],觀察Tca8113細胞生長的情況,繪制細胞生長曲線。檢測量子點標記的Tca8113細胞對其生物學(xué)行為的影響,包括:細胞侵襲重建基底膜實驗在transwell小室中進行,將穿膜細胞的平均數(shù)來表示腫瘤細胞的侵襲能力;Hank’s液輕洗2遍收集未粘附細胞計數(shù),每時間點隨機取3孔求平均值,計算不同時間的粘附率。聚碳酸多孔濾膜表面未鋪matrigel,其余步驟和方法與侵襲實驗相同,以穿膜細胞的平均數(shù)來表示腫瘤細胞的趨化運動能力。 結(jié)果:在激光共聚焦顯微鏡下量子點為接近圓型的橢圓紅色熒光體,最大發(fā)射波長為605nm,熒光強度為250。加入量子點40分鐘可見量子點開始進入細胞內(nèi),80分鐘細胞內(nèi)已有較多的量子點,120分鐘已有大量的量子點進入細胞,量子點主要分布在胞漿內(nèi)。對照組和不同濃度量子點標記的Tca8113細胞在各個時間點生長曲線基本一致。用量子點標記的Tca8113/QDs細胞和未標記的Tca8113細胞,其穿膜細胞均數(shù)分別為74.6±3.2、76.5±2.8,兩均數(shù)間無顯著差異(P㧐0.05)。在同一個時間點(30min、60min、90min、120min)量子點標記的Tca8113/QDs細胞和未標記的Tca8113細胞的粘附率沒有顯著性差別,說明經(jīng)量子點標記后的Tca8113細胞其粘附能力未發(fā)生改變。量子點標記的Tca8113/QDs細胞和未標記的Tca8113細胞侵襲至濾膜下表面的細胞數(shù)目分別為83.8±4.1、85.4±3.7,兩均數(shù)間無顯著差異(P㧐0.05),說明經(jīng)量子點標記后的Tca8113細胞未影響其趨化運動能力。 結(jié)論:量子點能夠以內(nèi)吞方式進入Tca8113活細胞內(nèi),進行細胞成像,從而可用來進行細胞表面標記和細胞內(nèi)標記,作為活細胞內(nèi)的標記物進行顯像奠定了基礎(chǔ)。量子點在激光共聚焦顯微鏡下量子點表現(xiàn)為接近圓型的橢圓紅色熒光體,最大發(fā)射波長為605nm,熒光強度為250。在Tca8113活細胞中,量子點主要分布在胞漿內(nèi)。不同濃度量子點(0.1μMol,1μMol,2μMol)標記的Tca8113細胞對Tca8113細胞的生長沒有影響。經(jīng)量子點標記后的Tca8113細胞的侵襲能力和趨化運動能力沒有影響。在同一個時間點(30min、60min、90min、120min)Tca8113/QDs和Tca8113細胞的粘附率沒有顯著性差異。本實驗證明了在Tca8113細胞內(nèi)標記高密度的[CdSe/ZnS]量子點后對癌細胞的侵襲、粘附及趨化運動能力等生物學(xué)行為沒有影響,為建立基于半導(dǎo)體量子點為基礎(chǔ)的技術(shù)平臺在活體生理條件下對腫瘤細胞和細胞內(nèi)分子進行實時動態(tài)“在線”研究提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R739.8
【圖文】：

半導(dǎo)體量子點[CdSe/ZnS]

26(C)圖 2. 半導(dǎo)體量子點[CdSe/ZnS]對 Tca8113 細胞的標記（倒置相差熒光顯微鏡下，×200）Fig.2 Semiconductor quantum dots’ mark to Tca8113 cell(Under FM, ×20和(C)分別顯示[CdSe/ZnS]在 40 分鐘、80 分鐘和 120 分鐘進入 Tca8113 細nd (C) separately demonstrated the situation when [ CdSe/ZnS ]enters the cell nute, 80minute and 120 minutes

【共引文獻】

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1 季列;周范民;;腦膠質(zhì)瘤組織中MMP-7、整合素αvβ5的表達及臨床意義[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年10期

2 王瑞年;;胃癌浸潤轉(zhuǎn)移機制研究新進展[J];國外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊);1993年04期

3 于曉Y

本文編號：2737782