【摘要】： 菌斑生物膜是黏附于牙齒表面的微生物團(tuán)體,是齲病發(fā)生的始動因子。生物膜中細(xì)菌的基因表達(dá)和表型明顯不同于浮游細(xì)菌,對抗生素具有較強(qiáng)的抵抗力。變形鏈球菌是公認(rèn)的致齲菌,變鏈素(mutacin)是由變形鏈球菌所產(chǎn)生的具有抑菌效果的細(xì)菌素。它有抑制與本菌不同株或不同型以及其它類型相近的細(xì)菌的生長,以維持其本身生存需要的作用,也是細(xì)菌在生存中的一個重要競爭手段。本實(shí)驗(yàn)通過固相合成技術(shù)、抑菌實(shí)驗(yàn)技術(shù)、動物實(shí)驗(yàn)技術(shù),人工合成了mutacinⅠ、Ⅲ及組成它們的8條短肽的一級結(jié)構(gòu),并對其進(jìn)行抑菌活性檢測,為進(jìn)一步的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。 1.mutacinⅠ、Ⅲ多肽及短肽的設(shè)計(jì)合成研究 本實(shí)驗(yàn)采用Fmoc固相多肽合成技術(shù)人工合成變形鏈球菌多肽Ⅰ、Ⅲ型mutacin及8條短肽。使用高效液相色譜儀分析提純,使用質(zhì)譜法碎片結(jié)構(gòu)分析技術(shù),對合成產(chǎn)物進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,準(zhǔn)確合成了Ⅰ型的全部24及Ⅲ型的全部22個氨基酸序列,準(zhǔn)確純度達(dá)80%,即具有抑菌活性。經(jīng)質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析,峰值與初始分子量的誤差 2‰,說明多肽合成成功(短肽合成與鑒定技術(shù)同上)。成功合成變形鏈球菌Ⅰ、Ⅲ型mutacin多肽及短肽,為多肽防齲疫苗研究提供了基礎(chǔ)。 2.mutacinⅠ、Ⅲ及短肽的體外抑菌研究 本實(shí)驗(yàn)研究人工合成mutacinⅠ、Ⅲ及短肽對牙菌斑主要致齲菌的抑制作用,尋找其活性基團(tuán)。采用二倍稀釋法檢測系列短肽對變形鏈球菌和血鏈球菌的最小抑菌濃度,并檢測其對變形鏈球菌、血鏈球菌、韋榮氏菌、粘性放線菌、內(nèi)氏放線菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌的抑菌圈直徑大小。結(jié)果顯示人工合成mutacinⅠ及Ⅲ及部分短肽類似物對變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、血鏈球菌有抑菌活性。mutacinⅠ、Ⅲ對變形鏈球菌的最小抑菌濃度為50%,即濃度在0.5mmol/ml以上具有抑菌能力,而合成的短肽對于變形鏈球菌沒有抑制作用。mutacinⅠ對血鏈球菌無抑菌效果,mutacinⅢ對血鏈球菌的最小抑菌濃度為50%,3號短肽與8號短肽對血鏈球菌的最小抑菌濃度為50%,其他短肽對血鏈球菌均無抑菌作用。根據(jù)其抑菌活性,可初步確定其活性基團(tuán)位置。 3.mutacinⅠ、Ⅲ中具有活性的短肽的體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)研究 通過應(yīng)用mutacinⅠ、Ⅲ中活性短肽,觀察大鼠口內(nèi)的菌斑生長情況。本實(shí)驗(yàn)選用SD大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周(接種鏈球菌)后,隨機(jī)分為4組,定期涂擦實(shí)驗(yàn)藥物。觀察4組大鼠上頜磨牙在擦藥前和擦藥2周后的菌斑面積變化,用Photoshop軟件和VC++6.0軟件做菌斑面積統(tǒng)計(jì),最后用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件檢驗(yàn)。結(jié)果顯示活性短肽組大鼠在擦藥后牙面上菌斑面積明顯小于涂藥前。肉眼觀察,牙齦無紅腫。根據(jù)結(jié)果可以推斷,具有活性的多肽在大鼠體內(nèi)能夠抑制牙菌斑的生長,并無粘膜毒性。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R780.2
【圖文】：

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圖 4 菌斑生物膜形成示意圖[7]1.7 牙菌斑生物膜與宿主之間的相互作用一個成熟的菌斑生物膜，需氧菌位于表面，厭氧菌位于深層，利于大量細(xì)菌在菌斑這一有限的生態(tài)環(huán)境中共存。細(xì)菌種類的多樣性也會因?yàn)榧?xì)菌之

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陸成華;變形鏈球菌對種植體周圍炎可疑致病菌抑制實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：2734507