【摘要】：目的： 研究慢性牙周炎(chronic periodentitis, CP)牙齦組織中細胞凋亡的情況,分析Caspase-3和Caspase-8在慢性牙周炎牙齦組織中的表達和意義,探討二者的表達與慢性牙周炎牙齦組織細胞凋亡之間的關(guān)系,為進一步揭示慢性牙周炎發(fā)病及相關(guān)組織損傷中的可能機制建立新的診斷和治療策略,并提供一定的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。 方法： 采用HE染色法普通光學(xué)顯微鏡觀察23例慢性牙周炎和23例健康牙齦組織石蠟切片中細胞凋亡的發(fā)生和形態(tài)學(xué)變化,并結(jié)合透射電子顯微鏡觀察凋亡細胞的超微結(jié)構(gòu),應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標記技術(shù)(TUNEL法)檢測慢性牙周炎和正常牙齦組織中細胞凋亡的情況和凋亡指數(shù)(apototic index, AI),同時運用免疫組化SP法檢測Caspase-3和Caspase-8的表達、分布情況。實驗結(jié)果采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,分析各組之間凋亡細胞指數(shù)及Caspase-3、Caspase-8的平均光密度和平均灰度值,并對Caspase-3和Caspase-8表達與慢性牙周炎牙齦組織細胞凋亡及兩者之間的關(guān)系進行相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1、較正常對照組,慢性牙周炎牙齦組織中發(fā)現(xiàn)顯著的細胞凋亡發(fā)生后的特征性形態(tài)學(xué)變化。 2、TUNEL細胞凋亡指數(shù)檢測 慢性牙周炎組牙齦組織中可見大量凋亡細胞,而正常對照組偶見少量凋亡細胞。慢性牙周炎牙齦組織中的AI(0.419±0.09),明顯高于正常對照組(0.058±0.05)(P0.05)。 3、免疫組化SP法Caspase-3的表達與分布檢測 正常對照組僅有少量Caspase-3陽性細胞表達,慢性牙周炎組牙齦組織中Caspase-3平均光密度值(0.56±0.06),顯著高于正常對照組(0.29±0.02)(t=19.510,P0.05)；平均灰度值(75.81±10.69),顯著低于正常對照組(128.41±4.45)(t=-20.387,P0.05)。和正常組相比,慢性牙周炎組牙齦組織中細胞Caspase-3表達明顯增強(P0.05)。 4、免疫組化SP法Caspase-8的表達與分布檢測 正常對照組僅有少量Caspase-8陽性細胞表達,慢性牙周炎組牙齦組織中,Caspase-8平均光密度值(0.36±0.02),顯著高于正常對照組(0.29±0.01)(t=16.381,P0.05)；平均灰度值(110.69±4.18),顯著低于正常對照組(131.75±3.39)(t=-17.673,P0.05)。和正常組相比,慢性牙周炎組牙齦組織中細胞Caspase-8表達明顯增強(P0.05)。 5、慢性牙周炎牙齦組織中Caspase-3和Caspase-8陽性表達與細胞凋亡的關(guān)系 慢性牙周炎患者牙齦組織中Caspase-3、8的陽性表達與AI呈正相關(guān),各組間有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 6、慢性牙周炎Caspase-3和Caspase-8表達的相互關(guān)系 統(tǒng)計學(xué)分析顯示,慢性牙周炎牙齦組織中Caspase-3和Caspase-8的陽性表達互不相關(guān),平均光密度比較(r=0.173,P=0.479,P0.05);平均灰度值比較(r=0.407,P=0.054,P0.05)。 結(jié)論： 1、慢性牙周炎牙齦組織中細胞凋亡顯著增加,表明細胞凋亡異常與慢性牙周炎的發(fā)生有一定關(guān)系。 2、凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和Caspase-8在慢性牙周炎牙齦組織中呈陽性表達,并且與AI呈正相關(guān),表明Caspase-3和Caspase-8與慢性牙周炎牙齦組織細胞的凋亡關(guān)系密切,二者介導(dǎo)的死亡受體凋亡途徑可能參與了慢性牙周炎的發(fā)病過程。 3、慢性牙周炎牙齦組織中Caspase-3和Caspase-8的表達互不相關(guān),提示細胞凋亡信號傳導(dǎo)途徑中除Caspase-8介導(dǎo)的死亡受體信號傳導(dǎo)途徑激活Caspase-3外,可能還存在其他凋亡途徑。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R781.4
【圖文】：

2結(jié)果2.1HE染色鏡下形態(tài)學(xué)觀察普通光學(xué)顯微鏡下可見，正常牙跟組織上皮層和固有層結(jié)締組織結(jié)構(gòu)基本正常，上皮釘突呈鋸齒狀，多而細長并較深地插入固有層中。固有層有大量致密的結(jié)締組織，連續(xù)清晰，有少量炎性細胞浸潤，膠原纖維排列整齊，極少發(fā)生充血、水腫等現(xiàn)象(圖1)。細胞形態(tài)正常，細胞核規(guī)整，染成均一藍色(圖2)。慢性牙周炎牙齲組織中可見鱗狀上皮輕度增厚、水腫，部分發(fā)生糜爛，上皮釘突明顯增生、延長，嚴重者呈弓形吻合或呈網(wǎng)狀。固有層中有大量慢性炎性細胞浸潤，主要以大量淋巴細胞、漿細胞為主，多圍繞小血管呈灶性分布，膠原纖維排列紊亂，部分發(fā)生斷裂，毛細血管擴張充血，內(nèi)皮細胞輕度腫脹(圖3)。凋亡細胞在上皮層組織中單個散在分布，表現(xiàn)為細胞變圓、變小，細胞核固縮、碎裂，染色變深呈藍黑色。(圖4)。

圖3.慢性牙周炎牙釀組織IIE染色(HE，x1OO)Fig.3HEstaininginthegingivaltissuesofchroniePeriodontitis圖4.慢性牙周炎牙豁組織HE染色(1」E，x400)Fig.4HEstaininginthegingivaltissuesofehroniePeriodontitis(HE，X100)(HE，X400).2透射電子顯微鏡細胞超微結(jié)構(gòu)觀察牙靚組織細胞透射電子顯微鏡超微結(jié)構(gòu)觀察可見:正常牙釀組織的細胞結(jié)構(gòu)完整，核形規(guī)則，胞膜完整，染色質(zhì)散在分布于細胞核內(nèi)，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體形態(tài)結(jié)構(gòu)規(guī)整，無腫脹擴張，未見空泡結(jié)構(gòu)(圖5)。慢性牙周炎牙跟組織中可見細胞凋亡早期，細胞核染色體發(fā)生邊集，電子密度增強，在細胞核膜周邊聚集形成新月形，核無固縮(圖6);隨之染色體發(fā)生固縮，核形不規(guī)整，核膜表面凹凸不平;細胞核發(fā)生碎裂，在細胞漿內(nèi)可見多個電子密度增強的核碎片(圖7);細胞皺縮，細胞核固縮變小，核膜內(nèi)陷，其內(nèi)的細胞器輕度增生，線粒體數(shù)目增加并伴腫脹擴張，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松與胞膜融合，形成空泡結(jié)構(gòu);在凋亡的晚期，可見部分胞膜卷曲、褶皺，形成膜包裹內(nèi)有較完整的細胞器和細胞核碎片的致密的凋亡小體(圖8)。

【參考文獻】

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本文編號：2731466