【摘要】：目的:利用分子生物學(xué)方法獲取兔的Soluble-100A6(S100A6)蛋白的基因并構(gòu)建其質(zhì)粒表達(dá)載體,采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染技術(shù)分別將目的基因表達(dá)載體和空載體轉(zhuǎn)染入雪旺細(xì)胞(Schwann Cells,SCs)中,鑒定兔S100A6基因表達(dá)載體,研究S100A6蛋白在SCs中的表達(dá)情況及其對(duì)SCs增殖的影響。方法:取家兔坐骨神經(jīng),提取SCs并培養(yǎng);構(gòu)建S100A6基因表達(dá)載體質(zhì)粒,對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證、鑒定,采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染技術(shù)分別將S100A6蛋白c DNA質(zhì)粒表達(dá)載體與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入SCs中,即:A組:S100A6c DNA+SCs;B組:空白載體+SCs。轉(zhuǎn)染成功后采用蛋白印跡法(Western Blot檢測(cè)S100A6蛋白在SCs中的表達(dá),分析兩組S100A6蛋白表達(dá)量的變化;同時(shí),采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)兩組SCs增殖情況。結(jié)果:1、經(jīng)凝膠電泳及PIRES2-EGFP-S100A6雙切酶驗(yàn)證,初步鑒定S100A6質(zhì)粒構(gòu)建成功;表達(dá)載體質(zhì)粒經(jīng)生物公司測(cè)序、與標(biāo)準(zhǔn)序列對(duì)比,證實(shí)S100A6質(zhì)粒載體構(gòu)建成功。2、蛋白印跡法(Western Blot)檢測(cè)S100A6過(guò)表達(dá)組SCs中S100A6蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組;3、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)過(guò)表達(dá)組增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)蛋白陽(yáng)性率(38.4%±4.8%明顯高于對(duì)照組(8.7%±1.4%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=13.44,P0.001)。結(jié)論:兔S100A6蛋白基因表達(dá)載體構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染SCs能夠提高細(xì)胞中S100A6蛋白表達(dá)量,S100A6蛋白可以促進(jìn)SCs處于增殖活躍狀態(tài)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R78;R688
【圖文】：

14內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文（2019）五、結(jié)果5.1 S100A6 電泳及雙酶切驗(yàn)證結(jié)果分析：S100A6 基因凝膠電泳及 PIRES2-EGFP-S100A6 雙切酶驗(yàn)證，均切出406bp 條帶（圖 2,3,4），大小符合理論預(yù)期，初步鑒定 S100A6 質(zhì)粒構(gòu)建成功；質(zhì)粒送生物公司測(cè)序結(jié)果與目的基因序列完全一致，測(cè)序結(jié)果經(jīng) NCBI 的 Blast 轉(zhuǎn)件及 CLSequence Viewer 4 軟件與標(biāo)準(zhǔn)序列對(duì)比，證實(shí)構(gòu)建的 S100A6 重組質(zhì)粒載體與標(biāo)準(zhǔn)的S100A6 基因序列相符（圖 1,5,6），進(jìn)一步證實(shí) S100A6 質(zhì)粒載體構(gòu)建成功。5.1.1 目的基因 S100A6 基因完整序列

100A6基因瓊脂糖凝膠電泳

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本文編號(hào)：2727300