【摘要】：背景和目的： 富血小板血漿(Platelet-rich Plasma, PRP)是經(jīng)過梯度離心之后獲得的血小板濃縮物,其富含多種生長因子,如轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、血小板源性生長因子AB (platelet derived growth factor-AB, PDGF-AB)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelis growth factor, VEGF)、胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor, IGF)等。PRP作為第一代血小板濃縮物被用于臨床研究中以促進(jìn)骨的再生。但關(guān)于PRP的真是效應(yīng)確存有爭議。有些研究認(rèn)為PRP并沒有明顯促進(jìn)骨質(zhì)再生的作用。PRP釋放生長因子的速度很快,往往在細(xì)胞從周圍組織中長入之前就已經(jīng)釋放了大量生長因子。有研究表明凝血酶可能對集體的細(xì)胞有毒性作用。 富血小板纖維蛋白(Platelet-rich fibrin, PRF)被認(rèn)為是第二代血小板濃縮物。PRF制備過程中無需添加凝血酶,其中具有纖維蛋白支架并能保護(hù)生長因子不受蛋白酶的分解。與PRP不同,PRF在使用后短時間內(nèi)不會被吸收。它類似于天然血凝塊,由于固態(tài)的纖維蛋白的存在,PRF在塑型改建過程中逐漸被吸收破壞。PRF中主要含有三種濃縮的生長因子(TGF-β1、PDGF-AB和VEGF),這些生長因子能夠持續(xù)釋放至少一周的時間。此外,PRF不僅是一種血小板濃縮物,而且能夠刺激機(jī)體防御機(jī)制發(fā)揮其免疫特性。這主要是由于PRF的纖維蛋白網(wǎng)內(nèi)有大量的白細(xì)胞,這些白細(xì)胞可以發(fā)揮重要的炎癥調(diào)節(jié)作用。 這些信息提示我們PRF與PRP之間可能通過不同的方式來釋放因子并產(chǎn)生作用。本研究的目的是比較富血小板纖維蛋白與富血小板血漿在體外釋放生長因子的含量及其對脂肪干細(xì)胞(Adipose tissue-derived stem cells, ADSCs)增殖分化的影響。 材料和方法： 1.PRF與PRP體外釋放生長因子的比較 抽取兔耳中央動脈血,一次離心法制備PRF,二次離心法制備PRP。分別將其置于5ml新鮮的α-MEM培養(yǎng)液中,37℃靜置。分別于1,7,14,21,28天時收集PRF與PRP析出液,使用ELISA試劑盒分別檢測PRP與PRF析出液中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)及血小板源性生長因子(platelet derived growth factor-AB, PDGF-AB)的含量。 2.PRF與PRP對ADSCs增殖分化影響的比較 無菌切除兔腹股溝處的脂肪組織,采用酶消化法原代培養(yǎng)兔ADSCs,多向誘導(dǎo)分化法鑒定ADSCs,取第三代細(xì)胞用于實驗。將PRP與PRF析出液分別配制成10%培養(yǎng)液,并設(shè)置陽性對照組和陰性對照組,分別培養(yǎng)ADSCs,血球計數(shù)法計算細(xì)胞增殖情況。同時將PRP與PRF析出液配制成含量為10%的成骨誘導(dǎo)液,并設(shè)置陽性對照組和陰性對照組,對ADSCs進(jìn)行成骨誘導(dǎo),堿性磷酸酶試劑盒檢測各組堿性磷酸酶表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.PRF與PRP體外釋放生長因子的比較 在PRF析出液中,TGF-β1含量在第14d最高(P0.01),PDGF-AB含量在第7天最高(P0.05)；PRP析出液中,TGF-β1與PDGF-AB的含量在第1d最高(P0.01)。 2.PRF與PRP對ADSCs增殖分化影響的比較 在PRF析出液中,其對ADSCs的增殖作用及堿性磷酸酶活性在14d最高(P0.05)；在PRP析出液中,其對ADSCs的增殖作用及堿性磷酸酶活性在第1d最高(P0.05)。 結(jié)論： 1.與PRP相比,PRF能夠緩慢持久的釋放生長因子。 2.與PRP相比,PRF對ADSCs的增殖作用及堿性磷酸酶活性隨時間延長逐漸增高,更能有力的促進(jìn)ADSCs的增殖分化。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R783.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2725732