【摘要】：口腔黏膜下纖維性變(oral submucous fibrosis, OSF)是一種慢性的、復(fù)雜的口腔黏膜疾病。主要表現(xiàn)為上皮下組織的炎癥反應(yīng)和黏膜下組織的進(jìn)行性纖維化。咀嚼檳榔是OSF的主要致病因素。OSF是一種口腔的癌前病變。OSF的癌變率高達(dá)7%-13%。OSF的發(fā)病及癌變機(jī)制也已成國(guó)內(nèi)外學(xué)者共同關(guān)注的焦點(diǎn)。本課題組的胡延佳用AffymetrixU133A2.0芯片構(gòu)建OSF頰黏膜組織的基因表達(dá)譜,并對(duì)部分差異表達(dá)基因進(jìn)行了驗(yàn)證。然而,僅在基因組水平研究OSF發(fā)生發(fā)展過程中DNA或是mRNA的變化不能完全闡明OSF發(fā)病過程中的分子機(jī)制。為了尋找新的OSF發(fā)病分子標(biāo)記物,本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)正常人和OSF患者的口腔頰黏膜組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定,對(duì)鑒定出來的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并采用Western blotting和免疫組織化學(xué)的方法對(duì)部分差異蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量和定性驗(yàn)證。 (一)蛋白質(zhì)組學(xué)篩選口腔黏膜下纖維性變病例差異蛋白質(zhì) 目的：準(zhǔn)確篩選正常人和OSF患者口腔頰黏膜組織的差異表達(dá)蛋白質(zhì),并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 方法：收集正常人(NBM組)和OSF患者(OSF組)的口腔頰黏膜組織標(biāo)本各10例,分組混合,形成1對(duì)標(biāo)本。對(duì)其進(jìn)行二維電泳分離(2-DE),經(jīng)圖像分析后找出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn),并進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MADLDI-TOF-MS)分析鑒定,并對(duì)質(zhì)譜鑒定出的蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 結(jié)果：得到的NBM組和OSF組的2-DE圖譜,經(jīng)過軟件分析得到表達(dá)差異在2倍以上的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)48個(gè)。采用MADLDI-TOF-MS對(duì)差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行鑒定,最終得到33個(gè)差異蛋白質(zhì)。其中,在OSF組中表達(dá)上調(diào)的有22個(gè),表達(dá)下調(diào)的有11個(gè)。 結(jié)論：比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能有效地鑒定OSF差異表達(dá)蛋白質(zhì),能為尋找OSF發(fā)病分子標(biāo)記物的提供參考數(shù)據(jù)。 (二)部分口腔黏膜下纖維性變病例差異蛋白質(zhì)的驗(yàn)證研究 目的：對(duì)前期鑒定的5個(gè)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量和定性驗(yàn)證研究并探討其臨床意義。 方法：收集NBM組和OSF組頰黏膜組織標(biāo)本,用于Western blotting分析的標(biāo)本各20例,用于免疫組織化學(xué)分析的標(biāo)本NBM組20例,OSF組60例。使用Western blotting和免疫組織化學(xué)的方法對(duì)5個(gè)差異蛋白質(zhì)(prohibitin、peroxiredonxin2、translationally controlled tumor proteinn calumenin及cellular retinoic acid binding protein1)在NBM組和OSF組中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果：Western blotting結(jié)果顯示OSF組中的prohibitin、 peroxiredonxin2及translationally controlled tumor protein的表達(dá)明顯上調(diào),calumenin及cellular retinoic acid-binding protein1的表達(dá)明顯下調(diào)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示OSF組中prohibiting peroxiredonxin2及translationally controlled tumor protein的陽性表達(dá)率分別為70.0%、71.7%、81.7%,明顯高于NBM組,calumenin及cellular retinoic acid binding protein1在OSF組的陽性表達(dá)率分別為8.3%、0%,明顯低于NBM組。 結(jié)論：5個(gè)差異蛋白質(zhì)的Western blotting和免疫組織化學(xué)結(jié)果與前期蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果相一致。3個(gè)上調(diào)蛋白質(zhì)和2個(gè)下調(diào)蛋白質(zhì)的差異表達(dá)能夠有助于解釋OSF發(fā)病過程中某些病理生理學(xué)改變,有望成為潛在的OSF發(fā)病的分子標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R781.5

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本文編號(hào)：2725617