【摘要】：目的 1、觀察體外應(yīng)用醋酸棉酚(GAA)對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞生長的影響； 2、檢測GAA對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞相關(guān)抑癌基因甲基化水平的影響； 3、檢測GAA對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞相關(guān)抑癌基因的mRNA表達(dá)的影響,為通過改變抑癌基因的甲基化狀態(tài)治療腫瘤提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 方法 1、常規(guī)培養(yǎng)人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞,用GAA處理細(xì)胞,顯微鏡下觀察處理前后腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-M的形態(tài)學(xué)改變； 2、通過MTT法檢測不同濃度的GAA對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞生長的影響,并計(jì)算GAA作用的IC50值； 3、通過甲基化特異性PCR (MS-PCR)方法檢測人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞在GAA作用48h、72h后相關(guān)抑癌基因甲基化狀態(tài)的改變情況； 4、通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-PCR)方法檢測人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞在 GAA作用24h、48h、72h后相關(guān)抑癌基因mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果 1、MTT法檢測顯示,GAA作用24h-72h后,藥物對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞生長產(chǎn)生抑制作用,在一定劑量范圍內(nèi)具有濃度及時(shí)間依賴性。測得24h、48h、72h的IC5o值分別為45.36μmol/L、18.92μmo1/L、9.27μmo1/L； 2、MS-PCR檢測顯示,人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞內(nèi)存在E-cadherin、p16基因的高甲基化。以終濃度19μmol/L、10μmol/L的GAA分別作用于人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞48h、72h, GAA對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞的E-cadherin、p16基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的高甲基化狀態(tài)產(chǎn)生部分逆轉(zhuǎn)作用； 3、RT-PCR檢測顯示,45μmol/L、19μmol/L、10μmol/L的GAA分別作用24h、48h、72h后,與對照組相比較,E-cadherin、 p16基因的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05)。 結(jié)論 1、GAA能抑制人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞的生長,在一定的范圍內(nèi),GAA對人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞的抑制性具有濃度及時(shí)間的依賴性； 2、人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞系中存在E-cadherin、p16基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的高甲基化,且一定濃度的GAA能夠使人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞系E-cadherin、p16基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化程度降低； 3、一定濃度的GAA能夠使人腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞系E-cadherin、p16基因的mRNA表達(dá)水平增高,并在一定范圍內(nèi)與GAA的濃度及作用時(shí)間呈正相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.87

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2718424