【摘要】：[目的] 克隆表達(dá)牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis, P.g)牙齦素中粘附素區(qū)域的Hgp44基因,并純化目的蛋白。觀察Hgp44基因作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后對其產(chǎn)生IL-6,IL-8的影響。 [方法] 通過PCR和基因重組技術(shù),克隆得到P.g ATCC33277的Hgp44基因,插入到克隆載體pMD18-T中并測序鑒定。經(jīng)過酶切后將目的基因片段與表達(dá)載體pET22b相連,構(gòu)建出表達(dá)質(zhì)粒pET22b-Hgp44。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)中,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,通過SDS-PAGE, Western blot進(jìn)行分析。用固定化金屬親和層析法(IMAC)對重組蛋白進(jìn)行分離純化,從而獲得目的蛋白Hgp44。 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,用不同濃度的Hgp44蛋白分別作用于HUVECs,用ELISA試劑盒檢測IL-6, IL-8的表達(dá)變化。 [結(jié)果] 成功培養(yǎng)牙齦卟啉單胞菌ATCC33277菌株,并克隆得到目的基因片段,約為1100bp,與預(yù)期大小相符,測序結(jié)果與GenBank中ATCC33277國際標(biāo)準(zhǔn)菌株的RgpA的等位基因序列U15282一致。IPTG誘導(dǎo)后的菌體經(jīng)SDS-PAGE后形成一個以包涵體形式存在的44KD的融合蛋白。Western blot檢測證實(shí)其具有免疫原性。用Ni-NTA柱純化后復(fù)性得到了目的蛋白Hgp44。最后得到終濃度約3.5mg/L的目的蛋白Hgp44。 ELISA檢測分析得到,Hgp44能促進(jìn)HUVECs分泌IL-6和IL-8,從而引起初始的炎癥反應(yīng)。 [結(jié)論] 成功克隆表達(dá)了牙齦卟啉單胞菌Hgp44基因,并純化出了目的蛋白。明確了目的蛋白對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6, IL-8的影響,為進(jìn)一步闡明Hgp44和人內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用關(guān)系及明確牙齦卟啉單胞菌與心血管疾病之間的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R780.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 湯亞玲,譚紅,葉玲,肖曉蓉,黃定明;黃芩對牙齦卟啉單胞菌生長、形態(tài)影響的體外實(shí)驗(yàn)[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2002年12期

2 劉潔;牙周病與心血管疾病的相關(guān)性及其可能機(jī)制[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2004年02期

3 張迪亞,陳莉麗;牙齦卟啉單胞菌脂多糖引起牙周炎癥的機(jī)制和特點(diǎn)[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;2005年06期

4 毛松,陳森,何安光;牙齦卟啉單胞菌對臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)IL-8和MCP-1 mRNA的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2002年02期

5 劉靜波;潘亞萍;;牙齦卟啉單胞菌致病島研究進(jìn)展[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

6 張結(jié);高津福;;牙齦卟啉單胞菌與冠心病[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2007年12期

7 寇育榮;潘亞萍;;牙齦卟啉單胞菌膜泡對牙齦上皮細(xì)胞MMPs基因表達(dá)的影響[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

8 鄧輝;吳亞菲;;牙齦卟啉單胞菌與動脈粥樣硬化發(fā)病的關(guān)系[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

9 張菲菲;夏慶銀;胡少鵬;苗玉華;;甘草酸對牙齦卟啉單胞菌生長影響的體外研究[J];廣東牙病防治;2011年03期

10 賈曉真,樊明文,邊專,陳智,李成章;牙齦卟啉菌及其膠原酶基因遺傳多樣性的研究[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2002年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張海霞;夏兆飛;;犬內(nèi)毒素血癥對血常規(guī)、肝腎功能、C-反應(yīng)蛋白和IL-6影響的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(上冊)[C];2010年

2 李嶸娟;楊婭;李治安;張小杉;王艷紅;謝謹(jǐn)捷;;超聲生物顯微鏡在ApoE敲除小鼠動脈粥樣硬化病變與血清IL-1、IL-6的相關(guān)性研究中的應(yīng)用[A];第十屆全國超聲心動圖學(xué)術(shù)會議論文[C];2010年

3 龔鳳英;鄧潔英;史軼蘩;;IL-1β和IL-6對大鼠垂體MtT/S細(xì)胞中人生長激素基因表達(dá)的影響及其機(jī)制的研究[A];中國生理學(xué)會2007年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2007年

4 李明玉;曾慶繁;;腹腔神經(jīng)叢阻滯對腹腔感染兔血清TNF-α和IL-6的影響[A];2009年西部麻醉學(xué)術(shù)論壇論文匯編[C];2009年

5 付守鵬;王瑋;楊占清;劉穎;劉英;袁川評;王凱;崔偉;陳巍;柳巨雄;;基于腦-腸軸的IL-6在大鼠IBD過程中的作用及其相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

6 袁少英;尹偉強(qiáng);覃湛;劉東生;張兆磊;李慎果;;中藥干預(yù)下慢性非細(xì)菌性前列腺炎(Ⅲb型)患者前列腺液中IL-4、IL-6、IL-10水平的變化及其與疼痛癥狀的相關(guān)性[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第十屆男科學(xué)術(shù)大會論文集[C];2010年

7 王紅霞;曾翔俊;穆晶;張立克;;IL-6誘導(dǎo)小鼠肌原細(xì)胞系C2C12 UII/UT系統(tǒng)的高表達(dá)[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

8 初劍英;林英麗;;sICAM-1、IL-6與未足月胎膜早破的關(guān)系和護(hù)理[A];醫(yī)改新政下護(hù)理改革之路系列研討會論文匯編[C];2010年

9 楊婷;廖曾林;文富強(qiáng);;血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)IL-6和IL-8[A];中國生理學(xué)會第23屆全國會員代表大會暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要文集[C];2010年

10 劉春玲;;sICAM-1、IL-6與未足月胎膜早破的關(guān)系和護(hù)理[A];第8屆全國重癥監(jiān)護(hù)�？谱o(hù)理新進(jìn)展研討會論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 常怡勇;淫羊藿藥理研究進(jìn)展[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

2 董晨明；張紅松；張正義;大黃制劑與抗生素聯(lián)用對重癥膿毒癥小鼠細(xì)胞因子有影響[N];中國醫(yī)藥報;2005年

3 梁薇;多角度探討中藥免疫抑制作用[N];中國醫(yī)藥報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 郭永華;牙齦卟啉單胞菌菌毛fimA基因遺傳多態(tài)性和致病性的研究[D];四川大學(xué);2005年

2 李蓉暉;IL-6對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲性的影響及相關(guān)機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2010年

3 劉青林;IL-6及低氧對人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲遷移的影響及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2011年

4 周杰;釉質(zhì)上皮型顱咽管瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒓癐L-6對釉質(zhì)上皮型顱咽管瘤細(xì)胞體外遷移特性的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

5 張栩;有氧運(yùn)動對動脈粥樣硬化斑塊易損性及基質(zhì)金屬蛋白酶，IL-6水平的影響[D];山東大學(xué);2011年

6 焦娟;蛋白磷酸酶4在IL-6誘導(dǎo)的肝臟胰島素抵抗中的作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

7 陳貴海;陰虛與動態(tài)衰老假說[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2004年

8 楊陽;骨橋蛋白對人膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞IL-6和IL-8表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2012年

9 范震;Ni～（2+）對齦下微生物影響的體外研究[D];四川大學(xué);2004年

10 馬翔宇;白細(xì)胞介素-17（IL-17）正向調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞IL-6正反饋表達(dá)及其調(diào)控機(jī)理的研究[D];山東大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張杰;牙齦卟啉單胞菌Hgp44基因誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6，IL-8的研究[D];浙江大學(xué);2012年

2 姜旭;梗阻性黃疸大鼠小腸組織IgA及IL-6mRNA的表達(dá)及其對腸粘膜屏障功能的影響[D];延邊大學(xué);2004年

3 范勝濤;干擾素及IL-6、IL-1β在腸道病毒71型感染過程中功能分析[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

4 張怡;高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞表達(dá)TNF-α及IL-6的機(jī)制探討[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

5 李昱;基于受體—配體空間構(gòu)象信息設(shè)計IL-6拮抗多肽[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

6 王曉霞;肺炎支原體、IL-6與冠心病相關(guān)性的初步研究[D];青島大學(xué);2005年

7 方潔;掃癬靈治療尋常型銀屑�。L(fēng)熱型）的臨床觀察及對血清IL-6的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2009年

8 張肇林;辛伐他汀對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞合成及分泌MCP-1、IL-1及IL-6的抑制作用[D];山東大學(xué);2010年

9 蔣宇;無創(chuàng)正壓通氣對急性左心衰患者血清NT-proBNP與IL-6的影響[D];暨南大學(xué);2010年

10 彭向東;細(xì)胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α與注意缺陷多動障礙的相關(guān)性研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號：2718531