發(fā)布時間：2020-06-14 12:53

【摘要】：目的：研究羥基喜樹堿能否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡。 方法：體外培養(yǎng)人口腔鱗癌細胞株-KB細胞,取處于對數(shù)生長期的細胞進行實驗,不同實驗方法根據(jù)羥基喜樹堿濃度采用不同分組方式。KB細胞經(jīng)羥基喜樹堿處理后,利用MTT試驗檢測羥基喜樹堿的細胞毒性作用,計算羥基喜樹堿對KB細胞的生長抑制率和半抑制濃度(IC50),并繪制生長抑制曲線。Hoechst 33258染色和流式細胞術(shù)分別對細胞凋亡進行定性和定量研究,Western blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異蛋白GRP78蛋白的表達情況,免疫熒光細胞化學(xué)檢測GRP78蛋白在細胞中的定位和轉(zhuǎn)位情況。數(shù)據(jù)均以x±s表示,利用SPSS10.0進行單因素方差分析。 結(jié)果：羥基喜樹堿對KB細胞具有細胞毒性作用,隨羥基喜樹堿濃度的升高毒性作用逐漸增強,24h和48h羥基喜樹堿的IC50分別為2.43μg/ml和0.072μg/ml。Hoechst 33258染色后,對照組細胞核多呈圓形或橢圓形,可見少量核分裂象,實驗組細胞核著色程度不一,可見典型凋亡細胞核型,胞核呈致密固縮或碎塊狀濃染。羥基喜樹堿作用于KB細胞48h后,隨其濃度的升高,各組細胞凋亡率逐漸升高,Western Blot結(jié)果提示Caspase-3蛋白和GRP78蛋白表達增高,Bcl-2蛋白表達降低,實驗組與對照組相比較均有顯著性差異(P0.05)。正常情況下,GRP78蛋白表達定位于KB細胞的胞漿,部分區(qū)域濃聚。KB細胞經(jīng)羥基喜樹堿刺激后,GRP78蛋白開始出現(xiàn)胞漿高表達,隨著藥物濃度的升高,逐漸向核周濃聚,最后定位于細胞核。 結(jié)論：1、羥基喜樹堿對口腔鱗癌細胞具有細胞毒性,呈劑量依賴關(guān)系。2、羥基喜樹堿能誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡。3、羥基喜樹堿誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡過程中Caspase-3蛋白表達增高、Bcl-2蛋白表達下降。4、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與羥基喜樹堿誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡的過程。5、GRP78蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細胞凋亡過程中的真正作用有待于進一步研究。
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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本文編號：2712811