【摘要】：口腔鱗狀細胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是目前發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤,約占口腔頜面部惡性腫瘤的80%,而舌鱗狀細胞癌是口腔癌中最常見的惡性腫瘤,易早期出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。目前較為認(rèn)可的治療方法是以手術(shù)為主并結(jié)合放療和(或)化療的綜合治療。盡管目前診療水平已有很大提高,但由于口腔鱗癌生物學(xué)行為以及口腔頜面部解剖結(jié)構(gòu)的特點,其治愈率和生存率仍不令人滿意。 口腔癌的發(fā)生與口腔癌前病變的存在及癌變密切相關(guān),常見的口腔癌前病變包括口腔黏膜白斑、紅斑和不典型增生等,其中口腔黏膜白斑是與口腔癌發(fā)生發(fā)展最為相關(guān)的一種癌前病變,其癌變率約3%-5%。由于白斑發(fā)病初期患者無明顯不適,且病情進展緩慢,早期往往不能引起患者的重視,當(dāng)局部出現(xiàn)硬結(jié)、疣狀、潰瘍或紅斑樣病變時,則可能已經(jīng)轉(zhuǎn)變?yōu)樵话ｋS著口腔癌前病變的發(fā)生和惡變機制的深入研究,特別是分子生物學(xué)研究的進展以及分子靶向治療在腫瘤治療中的應(yīng)用,為口腔癌的預(yù)防及治療提供新的思路。 流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),長期服用阿司匹林和其它非甾體類抗炎藥物(Non-steroidal antiinflammatory drugs, NSAIDs)治療其他疾病的人群,除了可以降低結(jié)腸息肉的大小和數(shù)量外,還可降低結(jié)腸息肉惡變的危險性,從而明顯降低結(jié)直腸癌的發(fā)病率。研究還發(fā)現(xiàn),NSAIDs可以用于預(yù)防前列腺癌、膀胱癌、食道癌、胃癌、乳腺癌以及頭頸部鱗癌的發(fā)生。NSAIDs的腫瘤防治作用主要與其抑制環(huán)氧化酶-2 (Cyclooxygenase-2, COX-2)的活性有關(guān),因此成為預(yù)防及治療惡性腫瘤的研究熱點。COX-2是環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase, COX)的一種誘導(dǎo)型酶,許多癌前病變和惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)COX-2的高表達,如胃腸上皮化生、食道癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、鼻咽癌和口腔癌等。COX-2誘導(dǎo)產(chǎn)生的前列腺素具有促進細胞增生、抑制細胞凋亡以及刺激新生血管形成等多種功能,而COX-2抑制劑可以通過抑制COX-2的表達及活性,進而抑制腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。 近年來研究證實,與胃腸道給藥相比,透皮給藥途徑避免了肝臟產(chǎn)生首過效應(yīng)和代謝后毒副作用,因而越來越受到人們的關(guān)注。口腔黏膜(舌下黏膜和頰黏膜)給藥途徑具有依從性好、血管豐富和位置相對固定等優(yōu)點,更重要的是一些脂溶性的藥物能經(jīng)過口腔黏膜細胞間的類脂質(zhì)成分進入組織和血液發(fā)揮藥物的作用,為口腔局部應(yīng)用COX-2抑制劑預(yù)防舌癌的發(fā)生發(fā)展提供有利的解剖及組織學(xué)依據(jù)。 本實驗采用選擇性COX-2抑制劑塞來昔布膏劑局部應(yīng)用于SD大鼠舌黏膜,研究對DMBA誘導(dǎo)SD大鼠舌癌發(fā)生的抑制作用。首先采用高效液相色譜法檢測局部應(yīng)塞來昔布后大鼠舌黏膜的吸收情況,然后采用光鏡法觀察組織病理學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色及Westewrn blot檢測COX-2及VEGF-C蛋白的表達,RT-qPCR檢測COX-2和VEGF-C mRNA的表達,ELISA檢測舌組織中PGE2的含量變化,為局部應(yīng)用COX-2抑制劑阻斷口腔癌發(fā)生發(fā)展提供實驗依據(jù)。 第一章局部應(yīng)用COX-2抑制劑塞來昔布在SD大鼠舌組織吸收的研究 將35只4周齡清潔級SD大鼠隨機分為7組,乙醚麻醉后將6%(w／w)的環(huán)氧化酶-2抑制劑塞來昔布膏劑涂抹于SD大鼠左側(cè)舌緣中部黏膜。于給藥后的5、10、15、30、60、90、120分鐘處死動物,切取舌組織,超聲漂洗、勻漿,加入一定體積的乙酸乙酯,旋渦混勻后離心,按一定比例吸取上清液,將上清液置于60℃氮氣揮干儀上揮干,流動相溶解殘渣,用0.22μm微孔濾膜真空負(fù)壓過濾后進樣。采用高效液相色譜儀檢測局部應(yīng)用塞來昔布膏劑在SD大鼠舌組織的吸收率,比較不同時間點塞來昔布在大鼠舌組織的吸收情況。結(jié)果顯示：局部應(yīng)用藥物后舌組織內(nèi)保留時間是4.4分鐘,組織中塞來昔布的最低檢測限為10μg·L-1 (S/N=3).舌組織勻漿液中塞來昔布在(25～800)μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為Y-1833.7X+39 255,R2=0.9894 (n=6);提取回收率為84.75%-90.21%,方法回收率為93.73%～98.85%；日內(nèi)RSD分別為0.35%、5.21%和3.73%；日間RSD分別為1.44%、4.33%,4.40%,且穩(wěn)定性良好。局部給藥后120分鐘內(nèi)塞來昔布在SD大鼠舌組織中的濃度波動于(0.804±0.056)～(3.382±0.167)μg·g-1之間。在15分鐘時藥物吸收達最高濃度。實驗結(jié)果表明,舌組織局部應(yīng)用塞來昔布后可迅速通過舌黏膜吸收,在舌組織內(nèi)達到較高的藥物濃度。采用高效液相色譜法檢測舌組織中的藥物濃度及吸收率,具有方法簡便靈敏、干擾小、重復(fù)性好等優(yōu)點,為進一步研究口腔局部應(yīng)用COX-2抑制劑預(yù)防口腔癌提供依據(jù)。 第二章局部應(yīng)用塞來昔布抑制DMBA誘導(dǎo)的SD大鼠舌癌變作用研究 將80只SD大鼠隨機分為兩組,用1%DMBA丙酮溶液涂抹大鼠左側(cè)舌緣黏膜并聯(lián)合局部創(chuàng)傷以誘導(dǎo)舌組織癌變,每周3次。塞來昔布組動物局部應(yīng)用6%(w／w)塞來昔布膏劑涂抹舌黏膜,每周5次。對照組不作此處理。動物分別于第8、12、16、20周處死,每組10只動物。切取舌組織分別進行組織學(xué)光鏡觀察、免疫組織化學(xué)染色及Western blot檢測COX-2及VEGF-C蛋白表達、RT-qPCR檢測COX-2、VEGF-C mRNA的表達以及ELISA測定舌組織中PGE2含量。實驗數(shù)據(jù)處理采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0處理,計數(shù)資料分別采用R×C卡方檢驗、Fisher精確概率法、兩樣本秩和檢驗和雙變量相關(guān)分析,計量資料采用One-way ANOVA、析因分析。結(jié)果表明,第8周時,組織病理觀察兩組均未發(fā)現(xiàn)癌變,而第12、16、20周對照組SD大鼠舌組織上皮異常增生及癌變的發(fā)生率均高于塞來昔布組,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化及Western blot結(jié)果顯示：第8、12、16、20周時,塞來昔布組COX-2、VEGF-C蛋白表達較對照組顯著降低(P0.05),兩者的表達強度均呈正相關(guān)(P=0.000)。RT-qPCR結(jié)果顯示：塞來昔布對COX-2 mRNA的表達無明顯影響,而對VEGF-C mRNA的表達除第8周外,其余各時間點均較對照組明顯下調(diào),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。ELISA結(jié)果：PGE2標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=0.273 4Ln (X)+0.185 3,R2=0.994 7。第16、20周時,對照組舌組織中PGE2含量明顯高于塞來昔布組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。第8、12周時,兩組PGE2含量無明顯差異(P0.05)。 通過實驗證實,局部應(yīng)用選擇性COX-2抑制劑塞來昔布膏劑具有抑制DMBA誘發(fā)的SD大鼠舌組織上皮異常增生及癌變的作用。其作用機制可能與抑制大鼠舌組織COX-2蛋白的活性、抑制PGE2的產(chǎn)生以及抑制VEGF-C的表達等有關(guān),為局部應(yīng)用選擇性COX-2抑制劑預(yù)防口腔癌的發(fā)生發(fā)展提供實驗依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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本文編號：2702539