【摘要】：近年來牙周炎對全身健康的影響已日益受到關注，人們逐漸認識到口腔疾病可影響全身健康狀態(tài)，遂提出了牙周醫(yī)學概念。而臨床中常被患者忽略的慢性根尖周炎是否會影響全身健康目前尚無定論。有學者認為既然慢性根尖周炎和牙周炎在發(fā)病過程和致病機制上有著眾多相似性，因而推論慢性根尖周炎也可通過某種機制，如引起菌血癥或細胞因子入血等，從而影響全身健康。而相關的臨床研究發(fā)現(xiàn)，慢性根尖周炎確可影響外周血中細胞因子的水平，但是否會引起特定組織器官的病變目前未見研究報道。 難治性根尖周炎是慢性根尖周炎中的特殊類型，其被定義為“經(jīng)反復多次規(guī)范根管治療仍遷延不愈”，且糞腸球菌被認為是導致難治性根尖周炎的最主要病原菌之一。同時腸球菌也是近年來醫(yī)院感染的常見條件致病菌,可引起泌尿道、手術傷口、血液感染等，在這些病癥中，腸球菌可通過血液循環(huán)系統(tǒng)引起菌血癥及遠隔器官的感染，或可通過影響外周血中細胞因子水平而影響全身健康。那么，問題是，糞腸球菌作為難治性根尖周炎的病原菌時，是否也會引起菌血癥，或遠隔器官的感染？ 考慮到難治性根尖周炎的致病菌較慢性根尖周炎較為單一和明確，同時其病情也較慢性根尖周炎更為復雜和難以控制，在臨床上危害更大，因此推測，如果慢性根尖周炎會影響全身健康，那么難治性根尖周炎將對全身健康的影響更大。另外一種可能，即使慢性根尖周炎作為一種局部炎癥不會影響全身健康，那也不能排除其特例，即糞腸球菌導致的難治性根尖周炎可能影響全身健康。 基于此，本課題組擬在前期構建的SD大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型基礎上，對比研究大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型和口腔常駐混合菌（不含糞腸球菌）感染慢性根尖周炎模型對大鼠全身狀況的影響，通過掃描電鏡觀察根尖生物膜的形成及其形態(tài)，檢測血液和部分臟器的相關指標（包括細菌培養(yǎng)、細胞因子檢測、組織病理檢測），探索慢性根尖周炎，尤其是糞腸球菌再感染根尖周炎與全身健康之間的相關性，并探討其可能的病理生理機制。 第一部分大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型根尖生物膜掃描電鏡觀察 方法：12只大鼠建立SD大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型，采用掃描電鏡分別觀察SD大鼠慢性根尖周炎組、消毒組、再感染組：導糞腸球菌1周及導糞腸球菌6周根尖生物膜的形成及其細菌組成，每個時間點3只大鼠。結果：慢性根尖周炎組僅在根尖孔附近觀察到孤島般局限性的細菌生物膜；消毒組未見明顯的生物膜，僅在根尖孔附近見少量球菌散在黏附；導糞腸球菌1周后在根尖孔附近，可見成團聚集黏附面積較小的生物膜，較消毒組球菌數(shù)量明顯增多；導糞腸球菌6周后，在距根尖孔1毫米范圍內可見大量的球菌聚集黏附，形成連續(xù)的成片狀的成熟的生物膜。結論：大鼠慢性根尖周炎模型中細菌可定植于根尖外表面形成根尖生物膜，糞腸球菌再感染根尖周炎可形成結構致密的成熟根尖生物膜。 第二部分大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型血液和部分臟器（心、肝、脾）的糞腸球菌檢測 方法：15只大鼠建立SD大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型，分別在導糞腸球菌后6小時、12小時、24小時、48小時、96小時各時間點隨機處死3只大鼠并采集大鼠血液及部分臟器（心、肝、脾）組織濾液，進行細菌培養(yǎng)，16SrDNA的PCR檢測及焦磷酸測序，并與標準菌株（糞腸球菌ATCC29212）對比，檢測血液和臟器的糞腸球菌感染是否源于根尖周炎病灶。結果：糞腸球菌再感染根尖周炎可引起一過性菌血癥，菌血癥僅發(fā)生于導糞腸球菌6小時。同時僅在導入糞腸球菌6小時和12小時可在肝臟和脾臟檢出糞腸球菌；而心臟中未檢出。結論：糞腸球菌再感染根尖周炎可引起一過性菌血癥，同時糞腸球菌可短暫停留在肝臟和脾臟中。 第三部分大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型血清細胞因子檢測 方法：39只大鼠建立SD大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型（再感染組）和口腔常駐菌混合感染慢性根尖周炎模型（慢性組），分別采集，慢性組：開放6周；消毒組；再感染組：導糞腸球菌后6小時、12小時、24小時、48小時、96小時、1周、2周、3周、4周、5周、6周，，各時間點3只大鼠血清，進行IL-2、IL-6和CRP的ELISA檢測。結果：再感染組3種細胞因子CRP、IL-6和IL-2的水平變化趨勢具有一定相似性：經(jīng)消毒后細胞因子水平開始下降，導入糞腸球菌的初期并未影響這種下降趨勢，但在24～96小時后其反折升高逐漸達高點，此后又下降，而在6周時又出現(xiàn)小幅升高。然而不同細胞因子出現(xiàn)峰值的時間不同：CRP水平于1周時達高峰；IL-6水平于2周時達高峰；IL-2水平在4周時達高峰。6周時再感染組與慢性組各細胞因子水平無統(tǒng)計學差異。結論：糞腸球菌再感染根尖周炎可影響大鼠血清中細胞因子IL-2、IL-6和CRP的表達水平。 第四部分大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型部分臟器（主動脈弓、心、肝、脾）的組織病理檢測 方法：18只大鼠建立SD大鼠糞腸球菌再感染根尖周炎模型（再感染組）和口腔常駐菌混合感染慢性根尖周炎模型（慢性組），分別在慢性組：開放3周、開放6周；消毒組；再感染組：導糞腸球菌后1周、3周、6周，各時間點隨機處死3只大鼠并采集主動脈弓、心臟、肝臟和脾臟組織塊，制作組織病理切片，HE染色，進行組織病理檢測。結果：再感染組和慢性組均可觀察到主動脈弓炎癥細胞的邊集、黏附甚至侵入血管內膜；僅在6周時心肌間可觀察到炎癥細胞浸潤，但未觀察到心肌細胞明顯損傷；肝臟可觀察到肝細胞的水腫，肝索排列紊亂，甚至肝細胞壞死等組織病理改變；脾臟中僅見炎癥細胞的浸潤，未見明顯改變。在主動脈弓和肝臟中，6周時再感染組的炎性改變較慢性組明顯。結論：在6周的觀察時間內，根尖周炎可致主動脈弓、心肌、肝臟和脾臟的炎性改變，糞腸球菌再感染根尖周炎致主動脈弓和肝臟的炎性改變較明顯。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R781.42

【參考文獻】

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本文編號：2701580