【摘要】：目的：本研究擬通過對人牙周膜成纖維細胞的原代培養(yǎng),探討其生物學特性,研究脂聯(lián)素受體在人牙周膜成纖維細胞的表達情況,以及脂聯(lián)素對人牙周膜成纖維細胞增殖的作用,為牙周組織再生的應用提供理論依據(jù)。 方法：1.收集12～16歲因正畸需要而拔除的健康前磨牙10顆,無菌條件下刮取根中1/3的牙周膜組織,采用玻片覆蓋組織塊法進行牙周膜細胞的原代培養(yǎng),對人牙周膜組織細胞進行體外傳代及分離純化,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化及生長增殖情況,并對所生長細胞的生物學特性進行免疫組化鑒定,取第三至五代用于實驗. 2.檢索Pubmed homorogene,查找脂聯(lián)素受體(Adipo R)引物序列,Adipo R引物由上海生工有限公司合成。抽提牙周膜成纖維細胞總RNA,逆轉錄合成cDNA后,PCR擴增目的片段,瓊脂糖凝膠電泳檢測分析AdipoR1和AdipoR2在人牙周膜成纖維中的表達情況。 3.選擇免疫組化鑒定為牙周膜成纖維細胞的同一組織來源培養(yǎng)的第4,5代牙周膜成纖維細胞,以2×104/ml的細胞濃度分別接種于96孔板中,24小時后分別加入脂聯(lián)素(0,5,10,20ng／μl),采用四唑鹽比色法(MTT)法,分別測第1,4,7天的細胞增殖活性。 結果：1.玻片覆蓋組織塊法分離培養(yǎng)的細胞在體外具有良好的增殖能力。免疫組化實驗顯示細胞波形絲蛋白染色呈陽性；角蛋白染色呈陰性,證明體外原代培養(yǎng)細胞及傳代細胞均為中胚層組織來源的牙周膜成纖維細胞,且無上皮來源細胞混雜。 2.瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示：Adipo R2在人牙周膜成纖維細胞中有陽性表達。 3通過四唑鹽比色法(MTT)法,初步測定脂聯(lián)素在一定濃度范圍內對人牙周膜成纖維細胞增殖具有促進作用。(P0.05)。 結論：1.采用玻片覆蓋組織塊法體外原代培養(yǎng)的牙周膜細胞,具有良好的增殖能力； 2.運用分子生物學檢測方法發(fā)現(xiàn)AdipoR2不僅在肝臟中表達,在牙周組織中亦有表達； 3.初步提示脂聯(lián)素在一定濃度范圍內可提高牙周膜成纖維細胞的增殖活性,為進一步研究脂聯(lián)素對人牙周膜成纖維細胞增殖、分化、炎癥因子表達及破骨細胞相關調節(jié)因子表達的作用奠定了基礎。
【圖文】：

白)0.0955士0.00910.2703士0.00300.2423士0.0)0.1250士0.03900.2955士0.0064*0.3115士0.0組)0.1495士0.0161*0.2948士0.1318*0.3123士0.1組)0.1335士0.04460.3075土0.00910.3120士0.0:*與對照組比較P<0.05測定結果表明，一定濃度的脂聯(lián)素干預作用后，促進了牙周膜成纖，，并且隨著脂聯(lián)素濃度的增加，這種促進作用亦增強，(尸<0.05)，
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R780.2

【引證文獻】

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1 李松澤;正畸牙移動過程中脂聯(lián)素（adiponectin）在牙周組織中表達的動物實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學;2012年

本文編號：2698627