【摘要】：目的： 應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片對糖尿病與正常大鼠種植體周圍骨組織的基因表達(dá)譜進行對比分析并篩選差異基因,對其涉及的生物過程進行分析,為探討糖尿病影響種植體骨結(jié)合的分子生物學(xué)機制及治療方法提供理論依據(jù)。 方法： 1.建立糖尿病大鼠模型選取20只體質(zhì)量為(280±20)g的雄性健康Wistar大鼠,隨機分為正常組和糖尿病組,每組10只。糖尿病組大鼠腹腔注射STZ55mg/kg誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,正常組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。72h后,糖尿病組大鼠尾尖取血測血糖濃度,高于16.7mmol/L則為建模成功。 2.種植體植入和標(biāo)本采集4%水合氯醛(100mg/kg)腹腔注射麻醉2組大鼠,在右側(cè)脛骨近骺端植入一顆1.4mm×4mm的純鈦種植體。術(shù)后常規(guī)飲食喂養(yǎng),糖尿病組大鼠定期每周測血糖,剔除血糖低于16.7mmol/L的大鼠。3個月后,大鼠于獲取標(biāo)本當(dāng)天拍右側(cè)脛骨側(cè)位片,后全麻下分離右側(cè)脛骨,截取種植體外周約1mm的骨組織,PBS液反復(fù)沖洗后,放入液氮罐內(nèi)備用。 3.全基因組表達(dá)譜芯片Trizol法分別提取糖尿病組及正常組種植體周圍骨組織的總RNA,分光光度計及變性瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)檢。通過逆轉(zhuǎn)錄法將Cy3熒光標(biāo)記到實驗組及對照組的cDNA上,制成探針,并與表達(dá)譜芯片進行雜交及掃描芯片熒光信號圖像,采用GenePix4000B掃描儀掃描芯片,GenePixpro V6.0讀取芯片的原始信號。以2倍的差異表達(dá)值(Ratio)篩選差異表達(dá)基因,并對差異基因涉及的生物過程進行分析。 4.RT-PCR驗證芯片結(jié)果選取芯片結(jié)果中表達(dá)顯著差異的2個因子采用RT-PCR技術(shù)觀察表達(dá)改變情況,對芯片結(jié)果進行RT-PCR驗證。 結(jié)果： 1.正常大鼠切口愈合良好,無炎癥,無感染,糖尿病大鼠偶有精神不振,出現(xiàn)多食、多飲、多尿癥狀,個別感染死亡。X線片示：正常組大鼠種植體與周圍骨緊密接觸,X線透射區(qū)基本消失；糖尿病組種植體周圍仍可見不同程度的透射區(qū)。 2.本實驗應(yīng)用全基因組表達(dá)譜芯片對糖尿病與正常大鼠種植體周圍骨組織中17983個基因進行分析,篩選出差異基因1084個,其中糖尿病組表達(dá)增強352個,表達(dá)降低732個。對實驗結(jié)果進行GO分析,發(fā)現(xiàn)差異基因涉及多個生物學(xué)過程,其中骨代謝和脂類代謝與種植體骨結(jié)合密切相關(guān)。 結(jié)論： 1.大鼠腹腔一次性大劑量注射STZ法可以建立穩(wěn)定可靠的糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠植入種植體后,種植體和骨組織的結(jié)合水平較正常大鼠略低。 2.糖尿病大鼠種植體周圍骨組織中與成骨相關(guān)的基因表達(dá)降低,與脂類代謝相關(guān)的基因表達(dá)升高。 3.基因芯片篩選糖尿病大鼠和正常大鼠種植體周圍骨組織差異表達(dá)的基因具有樣品用量少、高質(zhì)量、高速度、高敏感等特性。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R587.1;R783

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉建民;糖尿病性骨病[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)分泌學(xué)分冊);2003年02期

2 宋珂;杜建明;羅仁惠;曹穎光;;腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的骨形態(tài)發(fā)生蛋白7基因促種植體周骨缺損修復(fù)的實驗研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年04期

3 盧怡;施生根;牛忠英;許樟榮;師天鵬;;2型糖尿病患者牙周炎患病率與年齡、病程的相關(guān)性分析[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年07期

4 朱海波;麥一峰;;他汀類藥物對2型糖尿病患者骨鈣素代謝的研究進展[J];現(xiàn)代實用醫(yī)學(xué);2011年04期

5 郭月紅,朱北蘭;Ⅱ型糖尿病患者的牙周狀況及對糖化血紅蛋白(HbAIc)的影響[J];上海口腔醫(yī)學(xué);2004年02期

6 沈奕;李曉淼;王偉力;;骨形態(tài)發(fā)生蛋白7在骨科的應(yīng)用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年26期

7 孫昊;王旭東;沈國芳;蔣欣泉;張秀麗;代杰文;盧境婷;;Dlx2在MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化過程中的作用[J];中國口腔頜面外科雜志;2011年03期

8 呂嬌;劉洪臣;;糖尿病對種植體骨結(jié)合影響的研究進展[J];中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

9 熊偉,夏仁云;骨形態(tài)發(fā)生蛋白研究新進展[J];中國矯形外科雜志;2000年01期

10 鄭櫻;紀(jì)樹榮;周紅俊;劉根林;郝春霞;潘立東;;骨鈣素與脊髓損傷[J];中國康復(fù)理論與實踐;2007年01期

，

本文編號：2693298