【摘要】： 腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)是調(diào)節(jié)骨代謝的重要因子,其濃度的改變與老年性骨質(zhì)疏松(Senile Osteoporosis)及牙槽骨質(zhì)丟失(Alveolar Bone Loss)等多種骨性疾病息息相關(guān)。TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長有調(diào)控作用,但其調(diào)控機(jī)制尚不明了;有資料提示TNF-α可能對(duì)于骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)的成骨作用有調(diào)控作用,但其調(diào)控機(jī)制未明。本文通過對(duì)于觀察TNF-α對(duì)于大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響來研究TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長的調(diào)控作用,并觀察TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體(Bone morphogenetic protein receptors,BMPRs)基因表達(dá)的調(diào)控作用,來探索TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長調(diào)控作用的分子生物學(xué)機(jī)制。 目的: 觀察TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長的影響,研究TNF-α對(duì)成骨細(xì)胞BMPRs的調(diào)控作用,來探討TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞的分子生物學(xué)調(diào)控機(jī)制。 方法: 1.大鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定:取出生一周內(nèi)的Wistar大乳鼠頭顱骨標(biāo)本,采用酶消化法提取原代成骨細(xì)胞,DMEM完全培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。進(jìn)行三重鑒定:包括形態(tài)、堿性磷酸酶(ALP)活性和礦化結(jié)節(jié)檢測(cè)。 2.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長的影響.采用不同濃度TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞,利用MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖的變化;利用PNPP偶氮法檢測(cè)成骨細(xì)胞分化情況。 3.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞各型BMPR基因表達(dá)的影響。采用不同濃度的TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞,利用RT-PCR法檢測(cè)成骨細(xì)胞各型BMPRmRNA量的變化,并以大鼠GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化比較。 結(jié)果: 1.大鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定:成功培養(yǎng)出大鼠成骨細(xì)胞,并經(jīng)過鑒定表明其純度較高。 2.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞生長的影響:MTT法測(cè)定成骨細(xì)胞增殖活性,結(jié)果表明不同濃度TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞增殖均有抑制作用,其中TNF-α濃度大于50ng/ml時(shí),其吸光度(OD值)有明顯減少,與對(duì)照組的差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。PNPP偶氮法測(cè)定成骨細(xì)胞分化程度,結(jié)果表明,各濃度TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞ALP活性均有抑制作用,其中當(dāng)TNF-α濃度大于5ng/ml時(shí),其OD值有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3.觀測(cè)TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞各型BMPR基因的表達(dá):通過結(jié)果表明各濃度TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞后BMPR-IA和BMPR-II的mRNA量均減少(P＜0.05),BMPR-IB的mRNA的量有所增加(P＜0.05)。 結(jié)論: 通過結(jié)果,本研究發(fā)現(xiàn),TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞的增殖和分化均有抑制作用,并且對(duì)于成骨細(xì)胞BMPR-IA和BMPR-II的表達(dá)有其抑制作用。根據(jù)此結(jié)果可以得出TNF-α對(duì)于成骨細(xì)胞的調(diào)控作用機(jī)制有部分是通過影響B(tài)MP信號(hào)通路來完成的,從而影響骨的代謝。該結(jié)論為研究TNF-α與骨代謝疾病的關(guān)系提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R78

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2692078