【摘要】：研究背景 腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells,CSCs）理論認(rèn)為在腫瘤細(xì)胞中存在一類數(shù)量極少的（＜5%)、具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞，具有高度的自我更新、無(wú)限增殖和多向分化的潛能。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和放、化療的敏感性中起決定性的作用。這一理論的提出改變了人們對(duì)腫瘤發(fā)生、侵襲和治療認(rèn)識(shí)，為研究腫瘤的發(fā)病機(jī)理、發(fā)展、復(fù)發(fā)和治療提供了新的思路。尋找高效干細(xì)胞標(biāo)志物，分選和鑒別腫瘤干細(xì)胞成為腫瘤的研究熱點(diǎn)。醛脫氫酶（aldehyde dehydrogenas，ALDH）家族是一類具有氧化細(xì)胞內(nèi)各種醛類成為相應(yīng)的弱羧酸的解毒酶。最近幾年有研究指出醛脫氫酶(ALDH)可以用來(lái)富集干細(xì)胞樣細(xì)胞。乙醛脫氫酶1（aldehyde dehydrogenas1,ALDH1,ALDH1A1）已經(jīng)被用于乳腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、眼癌、造血系統(tǒng)惡性腫瘤、結(jié)直腸癌干細(xì)胞研究，并被認(rèn)為是一種有效的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物。因此，通過(guò)ALDH分選舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株中具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞亞群是可能實(shí)現(xiàn)的。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)檢測(cè)舌鱗癌細(xì)胞株中ALDH的表達(dá)，以期分選出ALDH~(hig)細(xì)胞亞群，并通過(guò)體外增殖、誘導(dǎo)分化、無(wú)血清培養(yǎng)和動(dòng)物致瘤等實(shí)驗(yàn)對(duì)ALDH~(hig)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，以期為尋找舌癌干細(xì)胞標(biāo)志物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分舌鱗狀細(xì)胞癌醛脫氫酶（ALDH）高表達(dá)亞群細(xì)胞的分選 目的： 通過(guò)檢測(cè)醛脫氫酶（ALDH)在人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞系中的表達(dá)，分選出ALDH高表達(dá)（ALDH~(hig)）亞群細(xì)胞。 方法： 檢測(cè)人舌鱗癌細(xì)胞Tca8113的ALDH的表達(dá)，運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)分選出ALDH高表達(dá)（ALDH~(hig)）和ALDH低表達(dá)（ALDHlow）亞群腫瘤細(xì)胞。 結(jié)果： 人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞系中含有高表達(dá)醛脫氫酶（ALDH）活性的細(xì)胞亞群，并且含量很低，只有1.3%。 第二部分舌鱗癌ALDH~(hig)亞群細(xì)胞的體外增殖、分化和無(wú)血清培養(yǎng) 目的: 通過(guò)進(jìn)行體外培養(yǎng)增殖、誘導(dǎo)分化和無(wú)血清培養(yǎng)成球?qū)嶒?yàn)，了解ALDH~(hig)、ALDHlow和未分選的腫瘤細(xì)胞的增殖速度差異，ALDH~(hig)細(xì)胞分化情況，和ALDH~(hig)、ALDHlow在無(wú)血清培養(yǎng)基里細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 方法: 將相同數(shù)量的ALDH~(hig)、ALDHlow和未分選的腫瘤細(xì)胞在傳統(tǒng)的普通培養(yǎng)基（serum supplemented medium,SSM）里進(jìn)行培養(yǎng)，定期用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況，，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。將分選收集的ALDH~(hig)腫瘤細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液，接種至含有RPMI1640完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，檢測(cè)培養(yǎng)后第3、5、7、9天細(xì)胞中ALDH的表達(dá)水平。將分選的ALDH~(hig)、ALDHlow細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，以2x104個(gè)/毫升的密度接種至培養(yǎng)瓶，加入無(wú)血清培養(yǎng)基（serum-free medium,SFM）,每天觀察細(xì)胞球形成情況，每3天換液。 結(jié)果: 在體外增殖實(shí)驗(yàn)中，分選出的ALDH~(hig)腫瘤細(xì)胞增殖能力要高于ALDHlow腫瘤細(xì)胞和未分選的腫瘤細(xì)胞，而且在體外培養(yǎng)的ALDH~(hig)腫瘤細(xì)胞中ALDH+比例逐漸下降至分選前的比例，ALDH~(hig)分化形成了ALDH~(hig)和ALDHlow。ALDH~(hig)腫瘤細(xì)胞能在SFM中懸浮生長(zhǎng)形成腫瘤細(xì)胞球， ALDHlow腫瘤細(xì)胞大部分死亡，未形成腫瘤細(xì)胞球。 第三部分舌鱗癌ALDH~(hig)亞群細(xì)胞動(dòng)物致瘤試驗(yàn) 目的: 通過(guò)動(dòng)物致瘤實(shí)驗(yàn)了解ALDH~(hig)、未分選的腫瘤細(xì)胞致瘤能力的差別。 方法: 將ALDH~(hig)和未分選的腫瘤細(xì)胞按不同數(shù)量級(jí)接種在裸鼠的背部皮膚下，觀察各組成瘤情況。 結(jié)果: ALDH~(hig)亞群腫瘤細(xì)胞比未分選腫瘤細(xì)胞致瘤性強(qiáng)。 結(jié)論 舌鱗癌Tca8113細(xì)胞系中存在一小群高表達(dá)醛脫氫酶的細(xì)胞，這群細(xì)胞具有增殖力強(qiáng)、多向分化、強(qiáng)致瘤力等腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性。ALDH可能是舌鱗癌干細(xì)胞的標(biāo)志物之一。
【圖文】：

舌鱗癌Tca8113細(xì)胞系A(chǔ)LDH活性檢測(cè)

32圖 6 ALDHhig細(xì)胞動(dòng)物致瘤實(shí)驗(yàn)Fig 6 Tumorigenicity of ALDHhigsubpopulation cells in tongue squamous cecarcinoma of NOD/SCID MICEA 102個(gè)細(xì)胞 ALDHhig細(xì)胞和未分選細(xì)胞均不能成瘤B 103、104個(gè)細(xì)胞 ALDHhig細(xì)胞能成瘤，未分選細(xì)胞未能成瘤C 105個(gè)細(xì)胞 ALDHhig細(xì)胞和未分選細(xì)胞均能成瘤，ALDHhig細(xì)胞瘤體大于未分選細(xì)胞瘤體D ALDHhig細(xì)胞和未分選細(xì)胞形成的瘤體（8 周）C D
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R739.86

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5 黃U

本文編號(hào)：2691950