【摘要】：第一部分 老年人熱休克蛋白60及抗體與冠心病和牙周炎關系的研究目的：研究老年人熱休克蛋白60(HSP60)、熱休克蛋白60IgG(HSP60IgG):和牙齦卟啉單胞菌熱休克蛋白60IgG(P.gHSP60IgG)與冠心病及牙周炎之間的關系,為了解冠心病新的危險因素提供理論依據。方法：入選2012年9-10月天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院老干部查體患者共160例,分為四組,即健康對照組、冠心病組、牙周炎組、冠心病合并牙周炎組,每組各40例,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定各組HSP60、HSP60IgG、P.gHSP60IgG的濃度,同時完善一般生化指標如肝腎功能、血脂等的檢查。結果：1.冠心病組、牙周炎組、冠心病合并牙周炎組人HSP60、人HSP60IgG、 P.gHSP60IgG濃度明顯高于健康對照組(P0.05),冠心病合并牙周炎組上述指標亦高于冠心病組和牙周炎組,牙周炎組P.gHSP60IgG濃度顯著高于冠心病組(P005),但冠心病和牙周炎組人HSP60、人HSP60IgG濃度無明顯差異(P0.05)。 2.冠心病組女性HSP60濃度明顯高男性(P0.05),牙周炎組女性P.gHSP60IgG濃度明顯高于男性(P0.05),冠心病合并牙周炎組女性HSP60IgG、P.gHSP60IgG濃度亦明顯高于男性(P0.05)。 3.各組間人HSP60、人HSP60IgG和P.gHSP60IgG濃度隨年齡增加有逐漸升高的趨勢,其中以80歲為界限,冠心病組、牙周炎組和冠心病合并牙周炎組≥80歲患者人HSP60濃度比80歲患者明顯升高(P0.05),冠心病合并牙周炎組80歲患者人HSP60IgG和P.gHSP60IgG濃度比80歲患者明顯升高(P0.05),牙周炎組≥≥80歲患者P.gHSP60IgG濃度比80歲患者有所升高,但無顯著性差異(P0.05)。 4.隨著體重指數(shù)(BMI)的升高各組間人HSP60、人HSP60IgG、P.g HSP60IgG濃度逐漸升高,冠心病合并牙周炎組BMI30超重患者人HSP60、人HSP60IgG濃度較其他各組超重患者明顯升高(P0.05)。 5.冠心病合并牙周炎組吸煙患者人HSP60濃度明顯高于非吸煙患者(P0.05),但其他各組顯示吸煙對人HSP60、人HSP60IgG和P.g HSP60IgG濃度影響不大(P0.05)。 6.飲酒對冠心病組、牙周炎組、冠心病合并牙周炎組人HSP60、人HSP60IgG影響較大,飲酒組的人HSP60、人HSP60IgG均明顯高于非飲酒組(P0.05)。 7.冠心病合并牙周炎組血脂水平低于其他各組,但人HSP60、人HSP60IgG和P.g HSP60IgG水平卻明顯升高(P0.05)。 8.經偏相關分析顯示：在控制年齡、身高、體重、吸煙史、飲酒、甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇等因素后,人HSP60和人HSP60IgG呈正相關(r=0.705, P0.01), P.gHSP601gG和人HSP60IgG呈正相關(r=0.825,P0.01)。 9.校正傳統(tǒng)的危險因素,年齡、性別、吸煙狀態(tài)、BMI后,經多元Logistic回歸分析顯示：P.gHSP60IgG和人HSP60IgG是CHD的危險因素之一(P0.05)。結論：人HSP60及人HSP60IgG、P.gHSP60IgG可能在冠心病和牙周炎之間起一定的橋接作用,患牙周炎的老年人可能更易發(fā)生冠心病,除了結合心電圖、臨床癥狀和冠脈造影檢查可明確外,適時測定人HSP60、人HSP60IgG和P.gHSP60IgG濃度可能對評估牙周炎患者是否易于合并冠心病有指導意義,因此老年人注意牙周衛(wèi)生、及時治療牙周炎可能有助于預防冠心病。 第二部分 牙齦卟啉單胞菌熱休克蛋白60干預人臍靜脈內皮細胞的研究目的：觀察牙齦卟啉單胞菌熱休克蛋白60(P.gHSP60)以不同濃度及時間干預人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)后,HUVEC表達內皮型鈣粘蛋白(VE-cadherin)、一氧化氮合酶(eNOS)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的變化及細胞增嫡和凋亡的趨勢,明確P.gHSP60致HUVEC功能障礙的具體機制。 方法：P.gHSP60分別以10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL不同濃度干預HUVEC后,在2小時、6小時、12小時、24小時用Western bloting、PCR、MTT比色法和Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術等方法從細胞蛋白表達,基因表達及細胞增殖和凋亡各層面了解HUVEC功能障礙及增殖與凋亡的情況。 結果：1. P.gHSP60以10pg/mL濃度干預HUVEC時,各種蛋白表達量隨時間變化未見明顯變化；P.gHSP60以100pg/mL濃度干預HUVEC時,VE-鈣粘蛋白、eNOS蛋白在干預24小時表達開始減少,Caspase-3蛋白表達開始增加；P.gHSP60濃度加大至1ng/mL干預HUVEC后6小時即誘導VE-鈣粘蛋白、eNOS蛋白表達減少,Caspase-3及其活性形式蛋白表達增加。P.gHSP60干預HUVEC VE-鈣粘蛋白、eNOS蛋白表達呈濃度和時間依賴性方式降低,Caspase-3蛋白表達則呈相反趨勢。 2. P.gHSP60以10pg/mL濃度干預HUVEC時,VE-鈣粘蛋白mRNA表達量隨時間變化未見明顯變化；P.gHSP60以100pg/mL濃度干預HUVEC時,VE-鈣粘蛋白mRNA表達在干預12小時開始降低,當P.gHSP60濃度加大至1ng/mL干預HUVEC后6小時即誘導VE-鈣粘蛋白mRNA表達減少,表現(xiàn)為濃度及時間依賴性方式改變。 3.P.gHSP60不同濃度干預HUVEC24小時,隨著濃度逐漸增加,細胞增殖能力逐漸降低。 4. P.gHSP60不同濃度干預HUVEC24小時,隨著濃度逐漸增加,細胞早期凋亡率逐漸增加。 結論：P.gHSP60干預HUVEC時,VE-鈣粘蛋白、eNOS、Caspase-3蛋白表達呈濃度依賴性和時間依賴性方式發(fā)生變化,VE-鈣粘蛋白、eNOS蛋白表達逐漸降低,Caspase-3蛋白表達逐漸增加,細胞增殖能力逐漸降低,早期凋亡率逐漸增加。P.gHSP60對HUVEC呈濃度依賴性及時間依賴性產生影響,進一步導致細胞功能障礙,甚至使凋亡率增加,從分子生物學角度證明牙周炎患者易于發(fā)生動脈粥樣硬化的機制。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R541.4;R781.4

【參考文獻】

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