【摘要】： 目的：牙周膜成纖維細胞是牙周組織最主要的細胞成分,在功能上也是最重要的細胞,其組織結構和功能可以隨外界不同刺激的改變而發(fā)生適應性改建。成纖維細胞的增殖、分化及其凋亡在其改建過程中相互影響且缺一不可。因此任何影響成纖維細胞增殖、分化及其凋亡的因素都能導致牙周支持組織的破壞。本研究以體外培養(yǎng)的成纖維細胞為研究對象,在成功構建成纖維細胞體外培養(yǎng)一力學刺激模型的基礎上,采用Hoechst 33258細胞染色、TUNEL染色、流式細胞儀及Caspase-3活性檢測等方法探討周期性張應力對成纖維細胞凋亡的影響,闡明Caspase-3在應力介導的牙周膜成纖維細胞凋亡中的作用,明確應力、成纖維細胞凋亡、Caspase-3三者之間的關系,為全面闡明咬合創(chuàng)傷的發(fā)病機理和尋找干預治療的關鍵靶點提供新思路和理論依據(jù)。方法：構建成纖維細胞體外培養(yǎng)一生物力學刺激模型,采用多通道細胞牽張應力加載系統(tǒng),分別對待測細胞動態(tài)加載0h、6h、12h、24h的張應力,其中0h為對照組。實驗組細胞的受力值為15%,頻率為10cycles/分,每一循環(huán)包括3-s stretch/3-s relaxation。采用Hoechst 33258染色及TUNEL染色觀察細胞凋亡情況,以流式細胞儀分析細胞周期,同時檢測Caspase-3的活性。結果：Hoechst 33258細胞染色結果顯示,對照組的細胞核為彌散均勻的圓形或橢圓形熒光,實驗組的細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)可見致密濃染的顆粒、新月體或環(huán)狀熒光。TUNEL染色結果顯示,實驗組較對照組的細胞核固縮,邊界清楚,細胞漿淡染,染色質(zhì)呈特異的棕黃色著染。流式細胞儀實驗結果顯示,成纖維細胞的細胞周期隨著加力時間的延長發(fā)生了變化,實驗組的細胞周期較對照組顯著延長。6h組,12h組加力的時間與細胞周期的延長呈正相關,且加力12h時達到高峰。然而,24h組的細胞周期卻出現(xiàn)了縮短。加力6h組,12h組的Caspase-3活性明顯高于對照組,而加力24h組的Caspase-3活性明顯低于12h組但高于對照組。本實驗結果提示周期性張應力可加速成纖維細胞的凋亡,在12h內(nèi)加力時間越長,早期凋亡越明顯。結論：周期性張應力能直接影響成纖維細胞的細胞周期；張應力12h時影響成纖維細胞凋亡的作用最為顯著。Caspase3活性與張應力對細胞周期及其凋亡的影響密切相關。
【圖文】：

加力12h(400X)圖2健加力24h(400X)

2Tunnel檢測在光學顯微鏡下，凋亡細胞體積縮小，核固縮，邊界清楚，細胞漿淡染，染色質(zhì)呈特異的棕黃色著染(見圖2)。圖2一1對照組未加力(400x)圖2一加力6h(400X)圖2一3加力12h(400X)圖2健加力24h(400X)圖 2Tunnel染色結果(Tunneldyei此result)(400x)
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R780.2

【參考文獻】

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