【摘要】：腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)是一種高度惡性的、源自閏管儲(chǔ)備細(xì)胞的上皮源性惡性腫瘤,占唾液腺上皮源性腫瘤的10%左右,是頭頸部較常見(jiàn)的唾液腺惡性腫瘤之一。腺樣囊性癌的臨床病理特點(diǎn)如下：(1)除實(shí)性型以外,一般生長(zhǎng)緩慢,但局部復(fù)發(fā)率較高；(2)腫瘤易沿神經(jīng)擴(kuò)散,并易侵入血管,造成血行性轉(zhuǎn)移；(3)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高,在病變?cè)缙诰涂砂l(fā)生,但局部頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低,轉(zhuǎn)移部位以肺為最多見(jiàn),因此一般不做選擇性頸淋巴清掃術(shù)；(4)轉(zhuǎn)移灶可能進(jìn)展緩慢,患者可以長(zhǎng)期帶瘤生存；(5)腫瘤浸潤(rùn)性極強(qiáng),腫瘤細(xì)胞沿著骨髓腔浸潤(rùn)；(6)單純放療不能達(dá)到根治,治療以手術(shù)輔以放療為主,腫瘤的局部控制率尚令人滿意。ACC腫瘤細(xì)胞有兩種：導(dǎo)管內(nèi)襯上皮細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞。瘤細(xì)胞有多種排列方式,根據(jù)細(xì)胞成分及排列情況將ACC腫瘤組織分為三種組織類型：篩孔型、管腔型和實(shí)性型,篩狀結(jié)構(gòu)是此瘤的最典型和最常見(jiàn)的結(jié)構(gòu)。目前,ACC的發(fā)病、增殖分化、侵襲轉(zhuǎn)移等機(jī)制尚不明確,該腫瘤的臨床早期診斷及治療均仍較為棘手。 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是由Bloom等人于1966年首次發(fā)現(xiàn),主要由活化T淋巴細(xì)胞分泌,因其抑制巨噬細(xì)胞移動(dòng)而得名。MIF在淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞等眾多細(xì)胞中呈組成性表達(dá),具有多種生物活性。MIF蛋白是由115個(gè)氨基酸殘基組成的同源三聚體結(jié)構(gòu),相對(duì)分子質(zhì)量為12.5KDa,MIF高度保守,與幾種細(xì)菌互變異構(gòu)酶有部分的相似性。MIF可能的受體主要有如下幾種：CD44、CD74、CXCR2及CXCR4。多年來(lái),MIF一直被認(rèn)為是一種炎癥介質(zhì),在炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。但近幾十年來(lái),不斷有研究發(fā)現(xiàn)MIF除了與機(jī)體炎癥及免疫狀況密切相關(guān)外,還廣泛參與機(jī)體的多種病理生理反應(yīng),包括細(xì)胞分化與凋亡、脂肪發(fā)生、腎臟病變、自身免疫性疾病、腫瘤生成等。研究發(fā)現(xiàn)MIF在多種腫瘤細(xì)胞中均呈高表達(dá),在細(xì)胞增殖分化、血管生成及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等過(guò)程中亦扮演重要角色。 目前,MIF在人唾液腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)發(fā)病過(guò)程中的作用機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)旨在評(píng)估MIF在腺樣囊性癌中的表達(dá)、定位及其在ACC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的生物學(xué)作用及可能的作用機(jī)制。進(jìn)一步探討MIF參與調(diào)控人唾液腺腺樣囊性癌細(xì)胞增殖、遷移以及侵襲的分子機(jī)制,為臨床治療SACC提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本研究?jī)?nèi)容分為以下三部分： 第一部分巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)在人唾液腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)及與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系 目的：檢測(cè)人唾液腺腺樣囊性癌組織、對(duì)照組織(包括正常唾液腺組織、舌鱗狀細(xì)胞癌組織)的MIF表達(dá)情況,比較MIF在人唾液腺腺樣囊性癌各病理學(xué)類型中的表達(dá)差異。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法對(duì)40例人唾液腺腺樣囊性癌及對(duì)照組組織(10例正常唾液腺組織,5例舌鱗狀細(xì)胞癌組織)進(jìn)行MIF染色,對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析,并對(duì)納入病例進(jìn)行隨訪。結(jié)果：MIF定位于腫瘤細(xì)胞胞漿和／或胞核。MIF在人唾液腺腺樣囊性癌組織(40例)及舌鱗狀細(xì)胞癌組織(5例)中均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),而正常唾液腺組織(10例)呈弱陽(yáng)性表達(dá)或陰性表達(dá)；MIF在人唾液腺腺樣囊性癌的三種病理學(xué)類型中均呈高表達(dá)狀態(tài),各類型之間無(wú)顯著性差異(P0.05)；轉(zhuǎn)移病例(n=11)的MIF表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)移病例(n=29)(P=0.0270.05)。結(jié)論：MIF在人唾液腺腺樣囊性癌中呈高表達(dá)狀態(tài),但其表達(dá)水平在各病理學(xué)分型中無(wú)差異；MIF高表達(dá)和SACC遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。 第二部分巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)相關(guān)蛋白在人唾液腺腺樣囊性癌的表達(dá)及相關(guān)性分析 目的：研究SACC組織中MIF相關(guān)蛋白的表達(dá)狀態(tài)及其相關(guān)性。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法對(duì)40例人唾液腺腺樣囊性癌組織的連續(xù)切片進(jìn)行MIF、HIF-1α、MMP-9、P53、p-JNK等蛋白的染色,并行半定量及相關(guān)性分析,同時(shí)定性檢測(cè)SACC組織的CD74表達(dá)情況。結(jié)果：MIF的4種相關(guān)蛋白在40例ACC組織中均呈陽(yáng)性表達(dá),HIF-1α定位于細(xì)胞核,P53及p-JNK定位于胞核和／或胞漿,MMP-9定位于胞漿。SACC組織中MIF高表達(dá)與p-JNK的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P0.05)；與MMP-9的表達(dá)呈中度正相關(guān)(P0.05,r=0.444)；MIF的受體CD74主要定位于細(xì)胞胞漿,在SACC組織中亦呈陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)論：HIF-1α、MMP-9、P53、p-JNK及CD74在SACC組織中均可查及陽(yáng)性表達(dá),且MIF的表達(dá)與p-JNK、MMP-9有關(guān),并可能與SACC的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。 第三部分巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)在人唾液腺涎樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2的表達(dá)及作用機(jī)制研究 目的：探討MIF對(duì)ACC-2細(xì)胞的影響方式及作用機(jī)制。方法：不同濃度的rMIF、ISO-1(MIF特異性抑制劑)及MIFsiRNA分別作用于ACC-2細(xì)胞系,通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)排斥實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ACC-2細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ACC-2細(xì)胞的遷移能力；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ACC-2細(xì)胞的侵襲能力；利用West Blotting等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)MIF、P38. MMP-9、P53、HIF-1α、ERK、p-ERK、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK等變化情況；結(jié)果：1.rMIF(0--200ng/ml)可在作用72h時(shí)表現(xiàn)出輕度促進(jìn)ACC-2細(xì)胞增殖效應(yīng)(P0.01,n=3)；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)rMIF對(duì)ACC-2細(xì)胞遷移及侵襲能力影響不明顯(P0.05,n=3)。2.以不同濃度的ISO-1(0--200μM)作用ACC-2細(xì)胞24h后,未見(jiàn)其細(xì)胞活性受影響(P0.05,n=3)；ISO-1(200μM)可明顯抑制ACC-2細(xì)胞增殖及遷移、侵襲能力(P0.01,n=3)；ISO-1可降低ACC-2細(xì)胞的MMP-9表達(dá),隨ISO-1的濃度升高,MMP-9蛋白的表達(dá)逐漸降低；而在ACC-2細(xì)胞中,p-JNK的蛋白表達(dá)水平則與ISO-1濃度呈正比,并與ISO-1呈濃度依賴效應(yīng)；3.以siRNA技術(shù)干擾ACC-2細(xì)胞后,經(jīng)Real-time PCR、 WB等相關(guān)方法檢測(cè)到ACC-2細(xì)胞的MIF表達(dá)明顯降低(P0.01)；降低了內(nèi)源性MIF分泌的ACC-2細(xì)胞與正常對(duì)照組細(xì)胞相比,細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力明顯下降(P0.01)；干擾后的ACC-2細(xì)胞經(jīng)不同濃度的rMIF作用后,ACC-2細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲效率明顯提高(P0.05)。結(jié)論：MIF在ACC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能通過(guò)降低JNK活性、上調(diào)MMP-9的表達(dá)以促進(jìn)腫瘤增殖和遷移。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.87

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2683211