【摘要】：目的：通過納秒脈沖電場聯(lián)合低濃度吉西他濱對人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲能力的研究,探討納秒脈沖電場聯(lián)合化療藥物吉西他濱對人舌鱗癌細(xì)胞的最佳聯(lián)合治療方案及其抗腫瘤效應(yīng),旨在為納秒脈沖電場在頭頸部腫瘤治療中的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用提供一定的實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：本實驗通過體外培養(yǎng)人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲實驗研究。實驗分為四組：空白對照組、吉西他濱組、納秒脈沖電場組、吉西他濱聯(lián)合納秒脈沖電場組。MTT法檢測在不同作用時間(24h、48h、72h)和不同給藥濃度(0.01μg/ml、0.1μ g/ml、1.0μ g/ml、10μ g/ml、100μ g/ml)吉西他濱對人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞增殖抑制作用以及不同場強(qiáng)的納秒脈沖電場(0,10,30,60kV/cm)聯(lián)合低濃度吉西他濱對Cal-27細(xì)胞增殖抑制的影響；平板克隆形成實驗檢測納秒脈沖電場聯(lián)合吉西他濱對Cal-27單細(xì)胞克隆形成能力的影響；Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染檢測納秒脈沖電場聯(lián)合吉西他濱對人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞凋亡的影響；透射電子顯微鏡檢測聯(lián)合作用前后引起的Cal-27細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化；Trans-well侵襲實驗和劃痕實驗檢測納秒脈沖電場聯(lián)合吉西他濱對人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響。 結(jié)果： 1)MTT法檢測結(jié)果：吉西他濱對人舌鱗癌細(xì)胞Cal-27細(xì)胞的增殖抑制能力與藥物作用時間、藥物作用濃度呈時間-劑量依賴性,隨著藥物濃度的逐漸升高和作用時間的逐漸延長,吉西他濱對Cal-27細(xì)胞的增殖抑制作用也逐漸變強(qiáng)。0.01μ g/ml的吉西他濱組在24h、48h、72h的細(xì)胞抑制率分別為7%,10%,38%,均未超過50%的細(xì)胞抑制率。選用抑制率較低的0.01μ g/ml的藥物濃度聯(lián)合不同場強(qiáng)的納秒脈沖電場處理Cal-27細(xì)胞,結(jié)果顯示細(xì)胞的增殖抑制率與納秒脈沖電場的作用場強(qiáng)和細(xì)胞培養(yǎng)時間成依賴關(guān)系。在60kV/cm的納秒脈沖電場聯(lián)合0.01μ g/ml的吉西他濱作用下, Cal-27細(xì)胞在24h、48h、72h的細(xì)胞增殖抑制率分別為79%、85%、92%,顯著高于吉西他濱組和納秒脈沖電場組的單獨(dú)作用效果。結(jié)果提示納秒脈沖電場聯(lián)合0.01μ g/ml吉西他濱對Cal-27細(xì)胞的增殖抑制能力有顯著的協(xié)同作用(SQ1;P0.01)。 2)平板克隆形成實驗檢測結(jié)果：0.01μ g/ml吉西他濱聯(lián)合納秒脈沖電場(10,30,60kV/cm)對人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞的單細(xì)胞克隆形成能力有顯著的抑制作用(SO1；P0.01)。 3)Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染檢測結(jié)果：0.01μ g/ml吉西他濱聯(lián)合納秒脈沖電場(10,30,60kV/cm)對人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均有明顯的協(xié)同作用(SQ1；P0.01),同一作用時間下,隨著納秒脈沖電場場強(qiáng)的提升,細(xì)胞凋亡率逐漸增大。提示納秒脈沖電場聯(lián)合吉西他濱誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡的作用具有場強(qiáng)依賴性。 4)透射電子顯微鏡結(jié)果：0.01μ g/ml吉西他濱聯(lián)合納秒脈沖電場(10,30,60kV/cm)能顯著誘導(dǎo)人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核皺縮、染色質(zhì)濃縮、線粒體空泡樣變性、凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化。 5)細(xì)胞侵襲實驗結(jié)果：0.01μ g/ml吉西他濱聯(lián)合納秒脈沖電場(10,30,60kV/cm)對人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞的侵襲能力有明顯的抑制作用,透過基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯減少,侵襲抑制率明顯升高,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(SQ1;P0.01)。 6)細(xì)胞劃痕實驗結(jié)果：0.01μ g/ml吉西他濱聯(lián)合納秒脈沖電場(10,30,60kV/cm)對人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞的遷移能力有明顯的抑制作用,細(xì)胞劃痕的愈合能力比未處理組細(xì)胞顯著減弱。 結(jié)論： 1)吉西他濱能顯著抑制人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的增殖,其增殖抑制作用呈時間-劑量依賴性。 2)納秒脈沖電場聯(lián)合0.01μ g/ml的吉西他濱對人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的增殖抑制能力、克隆形成能力和誘導(dǎo)凋亡能力有顯著的協(xié)同作用。 3)納秒脈沖電場聯(lián)合0.01μ g/ml的吉西他濱顯著抑制了人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的體外侵襲遷移能力。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.8

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本文編號：2682654