【摘要】：目的比較分析細(xì)胞色素P450 2A13 mRNA和蛋白分別在口腔癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)水平,探討細(xì)胞色素P450 2A13與口腔癌的相關(guān)性及其臨床意義。 方法采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)26例口腔癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中細(xì)胞色素氧化酶P4502A13 mRNA表達(dá)情況。采用CEQ8000測(cè)序儀對(duì)實(shí)時(shí)定量PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。采用Western-blotting技術(shù)對(duì)26例口腔癌及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中CYP2A13的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行定性分析。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,進(jìn)行秩和檢驗(yàn)分析。同時(shí)分析CYP2A13表達(dá)情況與各臨床生物學(xué)特征的關(guān)系。 結(jié)果1.熒光定量PCR技術(shù)對(duì)CYP2A13 mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行了定量分析:(1)CYP2A13mRNA在口腔癌組織中的表達(dá)為22.1731,低于其在對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)30.8269(P=0.0202),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)CYP2A13mRNA在口腔癌組織中的表達(dá):①男性患者癌組織中的表達(dá)12.3846,女性患者癌組織中的表達(dá)14.6154(P=0.2397),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;②年齡≤55歲患者癌組織中的表達(dá)9.6,年齡55歲患者癌組織中的表達(dá)15.9375(P=0.0204),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;③有轉(zhuǎn)移患者癌組織中的表達(dá)11.7692,無轉(zhuǎn)移患者癌組織中的表達(dá)15.2308(P=0.1321),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;④高分化患者者癌組織中的表達(dá)13.9524,中低分化患者者癌組織中的表達(dá)11.6(P=0.2847),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;⑤早期(Ⅰ+Ⅱ)患者者癌組織中的表達(dá)17.375,中晚期(Ⅲ+Ⅳ)患者者癌組織中的表達(dá)11.7778(P=0.0452),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2. Western-blotting技術(shù)對(duì)CYP2A13的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行定性分析:口腔癌組織中CYP2A13蛋白的表達(dá)量明顯低于其在對(duì)應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)量。組織標(biāo)本中CYP2A13蛋白的表達(dá)量與mRNA的表達(dá)量基本一致,進(jìn)一步驗(yàn)證了與CYP2A13 mRNA表達(dá)的組織一致性。 結(jié)論本次研究表明,CYP2A13在口腔癌組織中表達(dá)降低,結(jié)合CYP2A13的功能,說明CYP2A13的表達(dá)水平差異是口腔癌發(fā)生發(fā)展的分子基礎(chǔ),CYP2A13可能在口腔癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。CYP2A13在癌組織中的表達(dá)降低可能是口腔癌發(fā)生發(fā)展過程中的自我保護(hù)效應(yīng)。而該基因表達(dá)水平的下調(diào)對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)歸的影響有待于進(jìn)一步研究。
【圖文】：

10圖 5-1 低分化、中分化、高分化口腔癌 HE 染色箭頭所指為腫瘤細(xì)胞 標(biāo)記處為角化Figure5-1 poorly differentiat ed (Aand B), moderately differentiated (C and D) , well -differentiated ( E and Foral cancer HEstaining. The narrow direct t he t u mor cells, and the flag “ ”direct the kerati n pearl.

三條 rRNA 的清晰條帶,并且 18s 條帶的強(qiáng)度高于 28s。說明提取 RNA 質(zhì)量較好，基本無降解（圖 5-2-A）。圖5-2 口腔癌及癌旁組織RNA抽提及實(shí)時(shí)定量PCR電泳結(jié)果C：舌癌組織 N：癌旁組織Figure5-2 oral cancer and adjacent tissues RNA extraction and real-time quantitative PCR electrophoresisresultsC：cancer tissues N：adjacent tissues3 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，β-actin 為引物行 PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行 2.0%瓊脂糖凝膠電泳，可觀察到（圖 5-3）220bp 單一清晰條帶。證明逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物符合實(shí)驗(yàn)要求，，可作為 DNA 模板用于熒光定量 PCR 反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

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1 王守林;Xiao-Yang He;肖杭;王心如;Jun-Yan Hong;;特征性化學(xué)物對(duì)CYP2A13代謝活化黃曲霉毒素B1的影響[J];江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué);2006年04期

2 劉秀峰;施瑞華;王學(xué)浩;張國新;朱宏;郜恒駿;秦叔逵;;細(xì)胞色素P450相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)與原發(fā)性肝癌相關(guān)(英文)[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2006年03期

本文編號(hào)：2678011