【摘要】：目的:齲病是人類(lèi)口腔的常見(jiàn)病、多發(fā)病,世界衛(wèi)生組織已經(jīng)把齲病列為人類(lèi)重點(diǎn)防治的三大非傳染性疾病之一。變異鏈球菌是口腔中的常駐菌之一,同時(shí)也是齲病的主要病原菌。殼聚糖(chitosan, CS)是甲殼素脫乙酰化的衍生物,是自然界中唯一的堿性多糖。獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)使其具有抑菌、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)組織再生等功能。因其良好的生物相容性和可降解性,目前己被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。獨(dú)特的理化性質(zhì)使其便于制成膜、凝膠、微球等各種劑型,可滿(mǎn)足多種施藥途徑的需要;特有的生物粘附性,有助于抵御唾液的沖刷和稀釋。因而在齲病的預(yù)防和治療方面,具有巨大的應(yīng)用潛力。 三氟乙酸(trifluoroacetic acid, TFA)是一種含氟有機(jī)酸,它是許多有機(jī)化合物的良好溶劑,如與二硫化碳合用,可溶解蛋白質(zhì)。它也是有機(jī)反應(yīng)的優(yōu)良溶劑,是重要的有機(jī)合成試劑,由它可以合成各種含氟化合物。關(guān)于殼聚糖的抑菌效果已有不少報(bào)導(dǎo),本研究擬探索脫乙酰殼聚糖-三氟乙酸(CS-TFA)復(fù)合物對(duì)變異鏈球菌的抑菌效果以及對(duì)變異鏈球菌生長(zhǎng)和產(chǎn)酸的影響。 方法:測(cè)定CS-TFA對(duì)變異鏈球菌的抑菌效果,將CS-TFA加入變異鏈球菌培養(yǎng)基中,測(cè)定其最小抑菌濃度和最小殺菌濃度,殼聚糖和人工唾液作為對(duì)照組。取96孔板,采用對(duì)倍稀釋方法用TPY液體培養(yǎng)基配制實(shí)驗(yàn)溶液。加入濁度A540 =0.33的菌液40μl后,液體總體積為200μl。將96孔板于37℃厭氧環(huán)境中培養(yǎng)48h,取出肉眼觀察各孔中細(xì)菌生長(zhǎng)情況。需通過(guò)離心(3500r/min,離心8min),菌細(xì)胞用PBS緩沖液洗兩次,PBS緩沖液重懸后,觀察三組溶液對(duì)變異鏈球菌的抑菌作用。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度即該組溶液對(duì)變形鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)。 離心前,挑取肉眼觀察可能無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的溶液,劃線(xiàn)接種于TPY瓊脂平板,37℃厭氧培養(yǎng),分別觀察培養(yǎng)后24h、48h平板上有無(wú)菌落生長(zhǎng),無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度即為該藥物對(duì)變異鏈球菌的最小殺菌濃度(MBC)。 用TPY液體培養(yǎng)基將藥物配制成2倍終濃度的實(shí)驗(yàn)藥液,加入TPY液體培養(yǎng)基0.5ml和濁度A540=0.33的菌液0.25ml后,液體總體積為l.5ml。各組均于37℃厭氧培養(yǎng),在培養(yǎng)3h、22h、27h、32h、45h時(shí),分批取出各試管,菌懸液混勻, 3500r/min離心8min,吸取上清液lml,平鋪于玻璃平板上測(cè)定其pH值。 結(jié)果:CS-TFA和殼聚糖的最小抑菌濃度分別為1.0和1.5g/l,最小殺菌濃度為20g/l和30g/l,人工唾液組的細(xì)菌生長(zhǎng)迅速,在接種后16h達(dá)到最大濁度,而CS-TFA組(5.0 g/l)和殼聚糖組(4.5g/l)則表現(xiàn)出延遲生長(zhǎng),在接種后32h后達(dá)到最大濁度,CS-TFA抑菌效果要優(yōu)于殼聚糖。CS-TFA組和CS組的最終pH值分別為5.75和4.73,人工唾液組的最終pH值為3.52; pH值穩(wěn)定后,人工唾液加入CS-TFA后的pH值為4.55,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,CS-TFA組和CS組細(xì)菌存活率分別為80%和87%,而人工唾液組的細(xì)菌存活率為93%。 結(jié)論:CS-TFA對(duì)變異鏈球菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)酸均有一定的抑制作用,是一種具有臨床應(yīng)用前景的防治齲病復(fù)合物。
【圖文】：

對(duì)倍稀釋方法用TPY液體培養(yǎng)基將藥物配制成不同濃度的實(shí)驗(yàn)=0.33的菌液 40μl后，，液體總體積為 200μl。于37℃厭氧環(huán)境中觀察各孔中細(xì)菌生長(zhǎng)情況。離心(3500r/min，離心8min)，菌細(xì)胞用PBS緩沖液洗兩次，PB察實(shí)驗(yàn)組對(duì)變異鏈球菌的抑菌作用。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度即菌的MIC。前，挑取肉眼觀察可能無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的溶液，劃線(xiàn)接種于TPY瓊脂，分別觀察培養(yǎng)后24h、48h平板上有無(wú)菌落生長(zhǎng)，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)藥物對(duì)變異鏈球菌的MBC。取菌液后的96孔板置多孔板高效分析儀上，測(cè)定各孔液體635n。將經(jīng)離心、PBS洗菌和重懸的96孔板置多孔板高效分析儀上定各孔的吸光度值。△ A=A測(cè)定一A陰性對(duì)照測(cè)定的 △ A繪制折線(xiàn)圖。結(jié) 果

9圖 3. 兩種藥物對(duì)變異鏈球菌抑制作用的比較1為掃描電鏡下觀察正常條件下變異鏈球菌的形態(tài)，由圖可見(jiàn)變異球菌。2為脫乙酰殼聚糖-三氟乙酸（CS-TFA）對(duì)變異鏈球菌的抑菌圈，由清晰可見(jiàn)。圖3可見(jiàn)，當(dāng)殼聚糖濃度<1.5g/l時(shí)，隨著殼聚糖濃度的增加，對(duì)細(xì)漸增加，抑制作用曲線(xiàn)呈上升趨勢(shì)，當(dāng)殼聚糖濃度≥1.5g/l時(shí)，變受到明顯抑制，抑制作用曲線(xiàn)平穩(wěn)，曲線(xiàn)的拐點(diǎn)在殼聚糖濃度為1殼聚糖-三氟乙酸濃度<1g/l時(shí)，隨著CS-TFA濃度的增加，對(duì)細(xì)菌的強(qiáng)，抑制作用曲線(xiàn)呈上升趨勢(shì)，當(dāng)殼聚糖-三氟乙酸濃度≥1g/l時(shí)，穩(wěn)，變異鏈球菌的生長(zhǎng)受到明顯抑制，曲線(xiàn)的拐點(diǎn)在CS-TFA濃度為
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2671023