【摘要】：目的:口腔扁平苔蘚(OLP)是一種慢性炎癥性疾病,其病因和發(fā)病機制尚不清楚。IκB激酶α(Ikkα)調節(jié)的乳腺絲氨酸蛋白酶抑制劑(MASPIN)已被證明參與了慢性炎癥過程,但MASPIN對OLP慢性炎性反應的作用尚不清楚。因此,本研究的目的是探討MASPIN在OLP中的表達及其在炎癥反應中的作用。材料與方法:免疫組化染色和實時熒光定量PCR(Real-time PCR)分別檢測OLP及健康對照組中MASPIN、Ikkα的亞細胞定位和表達情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)比較OLP及健康對照組中炎性細胞因子(TNF-α,IL-6)的水平。脂多糖(LPS)刺激人口腔角質細胞(HOKs)部分模擬OLP炎性環(huán)境,使用CCK8和ELISA實驗分別檢測LPS對HOKs的毒性作用和LPS刺激HOKs后炎性細胞因子(TNF-α,IL-6)的表達情況,進而確定LPS刺激HOKs的最佳濃度;隨后將實驗分為四組:分別是實驗組(MASPIN plasmids、IKKαsiRNA),陰性對照組(MASPIN-plasmids NC、IKKα-siRNA NC),熒光對照組(MASPIN-pEX-1、IKKα-FAM NC)和LPS對照組(control),利用脂質體法分別轉染MASPIN質粒和IKKα小干擾RNA并檢測轉染效率;轉染成功后,將實驗分為三組:分別是實驗組(MASPIN plasmids、IKKαsiRNA),LPS對照組(control),空白對照組(negative control),利用Real-time PCR和Western Blot、ELISA分別檢測MASPIN過表達、IKKα沉默后LPS刺激的HOKs中MASPIN、IKKα及炎性細胞因子的mRNA和蛋白表達。結果:免疫組織化學實驗顯示MASPIN和IKKα主要定位于OLP組織上皮層的胞質中,另外,同健康對照組相比,OLP組中MASPIN低表達,而IKKα與炎性細胞因子(TNF-α,IL-6)高表達,且差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。CCK8實驗顯示5ug/ml和10ug/ml的LPS對HOKs無毒性作用,同時,ELISA實驗表明10μg/ml LPS刺激的HOKs中TNF-α和IL-6的蛋白表達量最高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),因此,本實驗最終選擇10ug/ml的LPS作為刺激濃度;Real-time PCR實驗表明MASPIN質粒和IKKαsiRNA均成功轉染入HOKs中,且轉染效率分別為57%和87%;此外,同LPS對照組相比,MASPIN過表達組中IKKα和炎性細胞因子TNF-α,IL-6低表達,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),這表明MASPIN過表達抑制了LPS刺激的HOKs中IKKα及TNF-α,IL-6的表達;相反,同LPS對照組相比,IKKα沉默組中MASPIN表達升高,而TNF-α,IL-6表達下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),這表明IKKα沉默促進了MASPIN的表達,抑制TNF-α和IL-6分泌。結論:本實驗發(fā)現(xiàn)OLP組織中MASPIN低表達,而IKKα和炎性細胞因子TNF-α、IL-6高表達;過表達MASPIN或沉默IKKα可通過抑制炎性細胞因子TNF-α和IL-6的表達而緩解LPS引起的炎性反應,推測MASPIN及IKKα可能參與并影響了OLP的發(fā)生發(fā)展,提示MASPIN和IKKα可能為OLP的潛在治療靶點。
【圖文】：

１６入 MASPIN plasmids 6h 后 FAM-NC 組中暗場及明場熒光細胞數(shù)量；（b）Real-ti和 Western Blot（右）檢測 MASPIN 過表達效率；（c）加入 IKKα siRNA6h 后 F及明場熒光細胞數(shù)量；（d）Real-time PCR（左）和 Western Blot（右）檢測 IK效率；(* p < 0.05, ** p < 0.01 vs. Control 組)圖 4 MASPIN 過表達和 IKKα 沉默效率檢測 MASPIN過表達抑制了HOKs中IKKα和炎性細胞因子的表達MASPIN質粒轉染成功后24h加入LPS，于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h，收細胞總RNA進行Real-time PCR實驗來檢測相關基因的表達，實驗結

eal-time PCR 檢測 IKKα 沉默后 MASPIN、TNF-α 和 IL-6 的 mRNA 表達；（b）WesteKα 沉默后 IKKα 和 MASPIN 的蛋白表達；（c，，d）ELISA 檢測 IKKα 沉默后 TNF-α（右）的蛋白表達 (# p < 0.05, ## p < 0.01 vs Negative Control 組；* p < 0.05, ** p < Control 組)圖 6 IKKα 沉默促進 MASPIN 表達、抑制炎性細胞因子表達
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R781.5

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本文編號：2671015