【摘要】：目的：在獲得含目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的轉(zhuǎn)基因番茄T0、T1、T2、T3代種子和轉(zhuǎn)基因生菜T0代種子的基礎(chǔ)上,應用PCR技術(shù)、GUS染色技術(shù)對不同生長時期的轉(zhuǎn)基因番茄后代植株進行跟蹤檢測,初步探索目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在轉(zhuǎn)基因番茄后代植株中的遺傳穩(wěn)定性,并對報告基因gus和目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的連鎖遺傳進行初步分析,鑒定和篩選含目的基因的T1代轉(zhuǎn)基因生菜植株。 方法：本試驗包括三部分 第一部分：防齲用轉(zhuǎn)基因番茄后代植株中外源目的基因穩(wěn)定性檢測 提取轉(zhuǎn)pacA-ctxB、pacP-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4代植株幼苗期、開花期、果實成熟期總DNA,利用PCR技術(shù)檢測和鑒定含有外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的轉(zhuǎn)基因番茄植株,每代種植11株植株。 第二部分：防齲用轉(zhuǎn)基因番茄后代植株中報告基因gus和目的基因的連鎖遺傳 1、采集轉(zhuǎn)基因番茄和非轉(zhuǎn)基因番茄植株幼根組織,通過組織化學染色定位法檢測轉(zhuǎn)pacA-ctxB、pacP-ctxB基因番茄后代群體T1、T2、T3、T4代植株中的gus基因。 2、采集轉(zhuǎn)基因番茄和非轉(zhuǎn)基因番茄植株葉片提取總DNA進行PCR檢測,篩選含外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的轉(zhuǎn)基因番茄植株。 第三部分：防齲用T1代轉(zhuǎn)基因生菜中目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的檢測 提取轉(zhuǎn)pacA-ctxB、pacP-ctxB基因生菜T1代植株總DNA,PCR法鑒定轉(zhuǎn)pacA-ctxB、pacP-ctxB基因生菜T1代植株。 結(jié)果：①提取含pacA-ctxB的T1、T2、T3、T4代轉(zhuǎn)基因番茄總DNA進行PCR擴增,幼苗期每代轉(zhuǎn)基因番茄植株分別有9、9、8、9株得到大小約為450bp的條帶,與陽性對照一致,陽性檢測率分別為81.8%、81.8%、72.7%、81.8%,開花期和果實成熟期檢測結(jié)果與幼苗期一致。②含pacP-ctxB的T1、T2、T3、T4代轉(zhuǎn)基因番茄幼苗期每代植株分別有9、8、8、7株得到大小約為506bp的條帶,與陽性對照一致,陽性檢測率分別為81.8%、72.7%、72.7%、63.6%,開花期和果實成熟期檢測結(jié)果與幼苗期一致。③轉(zhuǎn)pacA-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4代植株中分別有9、9、8、9株GUS染色為陽性,gus基因陽性株數(shù)與pacA-ctxB基因陽性株數(shù)完全一致,吻合率為100%,轉(zhuǎn)pacP-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4植株中分別有9、8、8、7株GUS染色為陽性,gus基因陽性株數(shù)與pacP-ctxB基因陽性株數(shù)完全一致,吻合率為100%。④提取10株轉(zhuǎn)pacA-ctxB基因生菜植株總DNA經(jīng)PCR擴增、電泳后,有6株見約450bp擴增條帶,與陽性對照一致；10株轉(zhuǎn)pacP-ctxB基因生菜植株總DNA經(jīng)PCR擴增、電泳后,有6株見約506bp擴增條帶,與陽性對照一致,其余植株和正常對照植株未有擴增條帶。 結(jié)論：①外源基因pacA-ctxB、pacP-ctxB整合進番茄基因組中,并且能夠在轉(zhuǎn)基因番茄的后代中穩(wěn)定的遺傳。②報告基因gus和目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在T-DNA中緊密連鎖遺傳,報告基因gus可用于研究pacA-ctxB、pacP-ctxB基因的遺傳。③PCR法對轉(zhuǎn)基因生菜植株進行檢測,獲得了含pacA-ctxB、pacP-ctxB基因的T1代轉(zhuǎn)基因生菜植株。
【圖文】：

圖1.pEAC10和pEPC10的酶切結(jié)果Fig.1ThedigestionresultsofPEAC10andPEPC10:DNAhindlllMarkerZ:pEAclo總J貢粒3、4:pEACIO雙酶切:DNADLZ000Marker6、7:pEPe一。雙酶叨8:pEpCIO總質(zhì)粒

日的從因j遺傳傳遞的初步分析3.3轉(zhuǎn)基因番茄植株的獲得轉(zhuǎn)基因植株的培育過程(見圖2)，將轉(zhuǎn)基因番茄T。、TI、TZ、T:代種子在仁壤中培育發(fā)芽(圖ZA)，發(fā)芽至芽長scm后移栽單獨生長2周后再移至大田(圖ZB)，大約在種植30天左丫。)l:始開花(圖ZC)，在90天左右番茄陸續(xù)成熟(圖ZD)。圖2轉(zhuǎn)基因番茄的培育 FigZTheeultivationofTransgenietomatosA育苗期C少千花期B幼曲期D成熟期3.4轉(zhuǎn)基因番茄后代植株目的基因PCR檢測結(jié)果3.4.1轉(zhuǎn)p““一c坎B基因番茄植株幼苗期、開花期、果實成熟期目的基因PcR檢測結(jié)果 3.4.1.1提取T}、T:、T:、T;代轉(zhuǎn)產(chǎn)孤」-C眾召基因番茄幼苗期植株時‘少}‘總DNA進行PCR擴增，分別有9、9、8、9株得到大小約為450bp的特異性條帶，與陽性對照一致。TI代植株第8、9株未檢測到LI的條帶，，T:代第6、9株未檢測到目的條帶
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R781.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 閆喜中;張銳;孟志剛;孫國清;周濤;郭三堆;;轉(zhuǎn)基因抗蟲棉Bt基因與npt Ⅱ基因的遺傳與表達[J];華北農(nóng)學報;2008年06期

2 曲岷;宋健;白吉剛;王秀娟;;植物轉(zhuǎn)基因及其在農(nóng)業(yè)中的應用[J];海洋湖沼通報;2008年04期

3 夏蘭芹,郭三堆;Bt殺蟲基因在轉(zhuǎn)基因雙價抗蟲棉中的整合與遺傳穩(wěn)定性[J];科學通報;2001年07期

4 黃曉t

本文編號：2669118