【摘要】： 牙齒發(fā)育是上皮與間充質(zhì)相互作用的結(jié)果,目前對(duì)牙齒早期發(fā)育的研究較多,但對(duì)后期的牙齒發(fā)育,特別是牙根的發(fā)育研究較少。牙胚發(fā)育至胚胎12d時(shí),指導(dǎo)牙齒形成的能力由上皮轉(zhuǎn)移到了間充質(zhì)內(nèi),此后間充質(zhì)(牙乳頭)可以指導(dǎo)成釉器上皮的形態(tài)發(fā)生,誘導(dǎo)非牙源性上皮形成牙齒組織。由此推測(cè)根部的牙乳頭內(nèi)可能也儲(chǔ)存著指導(dǎo)牙根發(fā)育的信息,且與冠部牙乳頭不同,從而導(dǎo)致了牙冠與牙根不同的發(fā)育模式。 本課題采用組織學(xué)、免疫組織化學(xué),體外培養(yǎng),腎被膜下移植,RT-PCR等方法擬對(duì)大鼠磨牙成釉器與冠、根部牙乳頭重組體進(jìn)行研究,觀察它們的相互作用,以探討根部牙乳頭是否可誘導(dǎo)成釉器形成上皮根鞘(Hertwig’s epithelial root sheath,HERS)及是否可形成牙根。主要內(nèi)容和結(jié)果如下: 實(shí)驗(yàn)一、大鼠第一、二磨牙牙胚成釉器與牙乳頭發(fā)育的組織學(xué)觀察 對(duì)出生后(Postnatal,PN)0-7d的SD仔鼠每天處死2只,常規(guī)制備下頜骨組織切片,HE染色,鏡下觀察第一、二磨牙牙胚發(fā)育狀況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)第一、二磨牙牙胚發(fā)育時(shí)序相差約2-3d,PN6-7d時(shí)第一磨牙的牙冠已基本形成,成釉細(xì)胞與HERS細(xì)胞可明顯區(qū)分,可采用機(jī)械的方法將牙根與牙冠分離,此時(shí)的根部牙乳頭未分化可用于重組實(shí)驗(yàn)。而PN1-2d時(shí)的第二磨牙牙胚仍處于鐘狀期,HERS尚未形成,內(nèi)釉上皮與牙乳頭細(xì)胞未能分化可用作重組實(shí)驗(yàn)的上皮和冠部牙乳頭的來源,從而為下面的實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)二、大鼠磨牙成釉器與冠、根部牙乳頭組織重組的體內(nèi)種植實(shí)驗(yàn) 選取PN2d的SD仔鼠第二磨牙的成釉器與其牙乳頭或PN7d的第一磨牙根部牙乳頭分別重組,經(jīng)體外培養(yǎng)后腎被膜下移植,2w后制備標(biāo)本鏡下觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),第二磨牙成釉器與冠部牙乳頭重組后可繼續(xù)發(fā)育形成牙齒樣的結(jié)構(gòu),而成釉器與第一磨牙根部牙乳頭重組后形成了骨樣的組織,上皮細(xì)胞被包裹于其中或位于其外側(cè),部分上皮細(xì)胞發(fā)生了角化。結(jié)果表明根部牙乳頭不能誘導(dǎo)成釉器上皮分化為成釉細(xì)胞,也未形成HERS。冠、根部牙乳頭的功能不盡相同。 實(shí)驗(yàn)三、大鼠磨牙成釉器上皮與冠、根部牙乳頭細(xì)胞重組的體內(nèi)種植實(shí)驗(yàn) 通過大鼠PN2d第二磨牙成釉器上皮細(xì)胞與PN7d第一磨牙根部牙乳頭細(xì)胞重組后體內(nèi)種植,發(fā)現(xiàn)形成了結(jié)構(gòu)更為紊亂的骨樣物質(zhì),上皮細(xì)胞位于纖維成分中,并發(fā)現(xiàn)有纖維組織被埋入骨樣物質(zhì)中,與之呈一定的角度,類似牙周膜纖維結(jié)構(gòu),說明經(jīng)根部牙乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)的成釉器上皮細(xì)胞有向牙根發(fā)育模式轉(zhuǎn)變的趨勢(shì),但還不能形成牙根結(jié)構(gòu)。 實(shí)驗(yàn)四、大鼠磨牙根部牙乳頭細(xì)胞對(duì)成釉器上皮細(xì)胞釉基質(zhì)蛋白表達(dá)的影響 將PN2d的仔鼠第二磨牙冠部牙乳頭和PN7d第一磨牙根部牙乳頭細(xì)胞分別培養(yǎng)2d后的條件培養(yǎng)液,加入PN2d第二磨牙成釉器上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中,對(duì)誘導(dǎo)后的成釉器上皮細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)根部牙乳頭誘導(dǎo)后的成釉器上皮細(xì)胞不表達(dá)釉原蛋白,表達(dá)成釉蛋白,與體外培養(yǎng)的HERS細(xì)胞釉基質(zhì)蛋白的表達(dá)相似。但根部牙乳頭是否能誘導(dǎo)成釉器上皮形成HERS仍需進(jìn)一步的研究。 總之,本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)根部牙乳頭不能誘導(dǎo)成釉器上皮分化,且誘導(dǎo)后不表達(dá)釉原蛋白,這也許是牙冠發(fā)育模式與牙根發(fā)育模式的不同所在。
【圖文】：

9 的表達(dá)，它們可以誘導(dǎo)間充質(zhì)內(nèi)的 P不只表達(dá)于將來要發(fā)育成牙齒的位置，而是廣泛 卻只存在于牙齒即將形成的部位，，在這個(gè)過程8 的作用，BMPs 不僅可以拮抗 FGF8 對(duì)間充質(zhì)限制該基因在特定的區(qū)域表達(dá)。因此可以推了 FGF 8，9 對(duì)間充質(zhì)的誘導(dǎo)作用，使牙胚無通過調(diào)節(jié) Lim-homebox 基因 Lhx6，7 在間充質(zhì)。因?yàn)?Lhx6，7 在間充質(zhì)內(nèi)的表達(dá)區(qū)域與牙齒即具體發(fā)生位置的確定，不僅取決于牙板上皮的界表達(dá)，而且與牙胚形態(tài)發(fā)生的局部信號(hào)調(diào)控密切胚在特定位置上的有序排列。

圖3.嚙齒類動(dòng)物切牙成釉細(xì)胞分化的機(jī)制釉細(xì)胞分化胞在完成其功能后就退化為結(jié)合上皮，無法再體外可以分化為成釉細(xì)胞的來源。骨髓來源的上皮細(xì)胞。胡冰等將骨髓來源的干細(xì)胞依據(jù)c-為造血干細(xì)胞，陰性為間充質(zhì)源性的干細(xì)胞。皮細(xì)胞混合再與牙源性間充質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)底膜沒有形成時(shí)遷移至成牙本質(zhì)細(xì)胞周圍，并達(dá)釉原蛋白和成釉蛋白。說明骨髓來源的干細(xì)化為成釉細(xì)胞，這為牙齒組織工程的上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R78

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2669032