【摘要】：目的：本研究擬討論富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）對人牙周膜成纖維細胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPDLFs)增殖和遷移能力以及與人骨髓基質(zhì)細胞（human bone marrow stroma cells,HBMSCs）共培養(yǎng)下的細胞增殖能力的影響，為PRP在牙周組織再生治療中的應用提供實驗數(shù)據(jù)。 方法： 1.采用組織塊培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)人PDLFs，檢測波形絲蛋白的表達，以確定其生物學來源；采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)細胞；PRP由江蘇省血液中心提供。 2、采用MTT法檢測不同濃度PRP（1%,5%,10%,,20%,30%,50%）對PDLF增殖能力的影響；transwell系統(tǒng)測定不同濃度PRP（1%,5%,10%,,20%,30%,50%）對HPDLFs遷移效果，無血清培養(yǎng)液為陰性對照，10%新生小牛血清為陽性對照。 3.將HPDLFs和HBMSCs按1：1接種至transwell系統(tǒng)中，不同濃度PRP（5%,10%,20%,30%,50%）分別加入transwell中，無血清培養(yǎng)液為陰性對照，10%新生小牛血清為陽性對照，另設PDLFs細胞單獨培養(yǎng)為共培養(yǎng)的陰性對照，培養(yǎng)7天進行MTT測定。 結(jié)果： 1.通過組織塊法分離培養(yǎng)的HPDLFs表達波形絲蛋白，屬于中胚層來源的細胞；通過全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)細胞呈成纖維細胞樣的外觀，在體外具有良好的增殖能力。 2. 3d、5d和7d時，各濃度PRP組與陰性對照組比較細胞量均顯著增高(P＜0.01)，以20%濃度組最佳(P＜0.01)；各濃度PRP組在7天的培養(yǎng)期內(nèi)均顯示明顯的時間依賴性。 與陰性對照相比，不同濃度的PRP均能明顯促進細胞遷移（P＜0.01），以10%的濃度組PRP效果（91.80±2.39）最佳(P＜0.01）。 3. 7天時，各濃度PRP組的細胞量均顯著高于陰性共培養(yǎng)對照組和陰性單獨培養(yǎng)對照組(P＜0.01）；并且共培養(yǎng)組比單獨培養(yǎng)增殖組增殖能力強(P＜0.01）；以10%PRP濃度組最佳(P＜0.01）。 結(jié)論：PRP能促進人牙周膜成纖維細胞的遷移和增殖，對與骨髓基質(zhì)細胞共培養(yǎng)條件下，PRP對人牙周膜成纖維細胞的增殖促進效果最佳。
【圖文】：

圖 1 .3 H PD L F 波 形蛋 白 陽性 （× 1 0 0 ） 圖 1 .4 HP D LF 陰性 對 照 （ ×1 0 0 ） Ta b 1 . 3 vi m en t i n is po s it i v e ly ex pr es se d in HP DL F （ × 10 0 ） Ta b 1. 4 v im en t i n is n eg a t i ve l y ex p r es se d in c on t ro l s （× 1 00 ） 2. 3 HB M S Cs 的形 態(tài)觀 察 在首 次 換 液前 ， 因 培養(yǎng) 液 中 有 大量 紅 細胞 ，無 法觀 察 細 胞生 長 情 況。 首 次 換液 并 經(jīng) PB S 清洗 后 可見 貼 壁細 胞， 散在 分 布，， 細胞 體 積 較大 ， 形 態(tài) 似成 纖 維 樣， 隨 著 培養(yǎng) 時 間 的延 長 ， 細 胞呈 團 簇 樣 生長 ， 可 見 多個 集 落形 成， 排列 成 漩渦狀 、 放 射狀 ( 見 圖 1. 5 , 1. 6 ) 。 7- 1 4 d 細胞 集 落 間相 互 融 合 成單 層 。

圖 1 .3 H PD L F 波 形蛋 白 陽性 （× 1 0 0 ） 圖 1 .4 HP D LF 陰性 對 照 （ ×1 0 0 ） Ta b 1 . 3 vi m en t i n is po s it i v e ly ex pr es se d in HP DL F （ × 10 0 ） Ta b 1. 4 v im en t i n is n eg a t i ve l y ex p r es se d in c on t ro l s （× 1 00 ） 2. 3 HB M S Cs 的形 態(tài)觀 察 在首 次 換 液前 ， 因 培養(yǎng) 液 中 有 大量 紅 細胞 ，無 法觀 察 細 胞生 長 情 況。 首 次 換液 并 經(jīng) PB S 清洗 后 可見 貼 壁細 胞， 散在 分 布， 細胞 體 積 較大 ， 形 態(tài) 似成 纖 維 樣， 隨 著 培養(yǎng) 時 間 的延 長 ， 細 胞呈 團 簇 樣 生長 ， 可 見 多個 集 落形 成， 排列 成 漩渦狀 、 放 射狀 ( 見 圖 1. 5 , 1. 6 ) 。 7- 1 4 d 細胞 集 落 間相 互 融 合 成單 層 。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R780.2

【參考文獻】

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本文編號：2666454