【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本文就黃芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞(Human Gingival Fibroblast,HGF)生物活性作用進(jìn)行討論,探討其對(duì)成纖維細(xì)胞增殖、遷移及膠原分泌的影響,并與表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal Growth Factor,EGF)進(jìn)行比較,為如何促進(jìn)牙齦軟組織增量及加速創(chuàng)口愈合開辟一種中西醫(yī)結(jié)合的新研究方法。實(shí)驗(yàn)方法:1.取臨床患者種植手術(shù)環(huán)切下的的牙齦組織,提取原代牙齦成纖維細(xì)胞,傳代培養(yǎng),細(xì)胞凍存及復(fù)蘇。2.采取免疫組化及免疫熒光方法鑒定細(xì)胞來源。3.繪制牙齦成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,觀察其生長(zhǎng)周期規(guī)律。4.采用CCK-8方法分別于24h、48h、72h時(shí)檢測(cè)不同濃度黃芪多糖對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞增殖能力的影響。(黃芪多糖濃度分組依次為A組0μg/ml,B組12.5μg/ml,C組25μg/ml,D組50μg/ml,E組100μg/ml,F組200μg/ml,G組400μg/ml)。5.采用考馬斯亮藍(lán)方法于72h時(shí)檢測(cè)不同濃度黃芪多糖對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞分泌總蛋白量的影響。6.采用CCK-8方法分別于24h、48h、72h時(shí)檢測(cè)不同濃度表皮生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞增殖能力的影響。7.劃痕實(shí)驗(yàn)分別于24h、48h、72h時(shí)檢測(cè)黃芪多糖和表皮生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞向創(chuàng)口遷移移行愈合率的影響。8.黃芪多糖和表皮生長(zhǎng)因子處理成纖維細(xì)胞24h、48h、72h時(shí),ELISA方法檢測(cè)Ⅰ膠原的表達(dá)。9.實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì),單因素方差分析法分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.采用組織塊培養(yǎng)法提取原代牙齦成纖維細(xì)胞,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,角形或星形,細(xì)胞核呈圓形或卵圓形,位于細(xì)胞中央,細(xì)胞狀態(tài)良好。2.免疫組化及免疫熒光染色結(jié)果表明抗波形蛋白抗體呈陽性表達(dá),抗角蛋白抗體呈陰性表達(dá)。證明提取細(xì)胞為間充質(zhì)來源細(xì)胞,無上皮源性細(xì)胞混雜。3.繪制牙齦成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線大致呈“S”型,第1-2天生長(zhǎng)緩慢,第3-5天呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng),第6-7天趨于平穩(wěn),符合一般細(xì)胞增殖規(guī)律。4.CCK-8結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均能促進(jìn)HGF增殖,B組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),C組和D組在培養(yǎng)48h和72h時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增殖能力高于對(duì)照組(P0.05)。E組、F組和G組24h、48h和72h促進(jìn)細(xì)胞增殖能力高于對(duì)照組(P0.05)。72h時(shí)F組促進(jìn)細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)(P0.001),G組促進(jìn)細(xì)胞增殖能力較F組略下降。5.不同濃度黃芪多糖處理HGF72h后,B組總蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比較無差異(P0.05),C組-G組細(xì)胞總蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組(P0.05),F組總蛋白表達(dá)量最高。6.與對(duì)照組比較,EGF濃度為40 ng/ml和80 ng/ml時(shí)處理HGF48h和72h后,明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖(P0.05),80 ng/ml的EGF在48h時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增殖效果最顯著(P0.001)。7.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,24h時(shí)各組細(xì)胞移行愈合率無明顯差異(P0.05),48h時(shí)黃芪多糖組和EGF組移行愈合率高于α-MEM組(P0.01)。72h時(shí)見多數(shù)細(xì)胞裂解,無法統(tǒng)計(jì)結(jié)果。8.Elisa檢測(cè)結(jié)果表明,24h、48h和72h時(shí)黃芪多糖組細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原表達(dá)高于對(duì)照組(P0.05),48h和72h時(shí)EGF組Ⅰ型膠原表達(dá)高于對(duì)照組(P0.01)。結(jié)論:黃芪多糖可以促進(jìn)牙齦成纖維細(xì)胞的增殖、總蛋白的分泌及Ⅰ型膠原的表達(dá),并趨化牙齦成纖維細(xì)胞向創(chuàng)口處遷移,加速創(chuàng)口愈合。
【圖文】：

圖 3.1 光學(xué)顯微鏡下原代牙齦成纖維細(xì)胞放大不同倍數(shù)的細(xì)胞形態(tài)A．放大倍率 4× B.放大倍率 10× C.放大倍率 20× D.放大倍率 40×3.2 細(xì)胞鑒定3.2.1 免疫組織化學(xué)染色

圖 3.2.1 光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞角蛋白染色呈陰性 A.放大倍率 10× B.放大倍率 20×細(xì)胞波形蛋白染色呈陽性 C．放大倍率 10× D.放大倍率 20×3.2.2 免疫熒光染色
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R78

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫政華;邵晶;郭玫;;黃芪化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J];中醫(yī)臨床研究;2015年25期

2 邵玲玲;邵麗黎;賈向東;;黃芪注射液治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的臨床效果及機(jī)制探討[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;2015年04期

3 滕騰;孫鑫;張冉;柳忠豪;;黃芪多糖對(duì)高糖環(huán)境下MC3T3-E1細(xì)胞活性影響的研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2015年06期

4 王雪梅;薄磊;祁晶;余占海;馬興銘;;黃芪多糖對(duì)大鼠口腔潰瘍治療作用研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2013年03期

5 周勇;姚昶;高峰;高衛(wèi)衛(wèi);陳運(yùn);繆雪華;;黃芪多糖膠原干預(yù)周圍組織中核因子κB與血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)而促進(jìn)毛細(xì)血管新生[J];中國(guó)組織工程研究;2012年07期

6 曾健;施育才;張衛(wèi)東;陳一;;中藥黃芪輔助治療牙周炎的效果觀察[J];口腔醫(yī)學(xué);2011年07期

7 施育才;曾健;王佩飛;陳敘;陳一;張衛(wèi)東;;中藥黃芪促進(jìn)牙周組織再生的初步觀察[J];口腔醫(yī)學(xué);2010年04期

8 楊力,郭樹忠;成纖維細(xì)胞與創(chuàng)傷修復(fù)的生物學(xué)過程[J];中國(guó)臨床康復(fù);2002年04期

9 黃康,陳玉林;創(chuàng)面愈合評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)展[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2001年02期

10 丁韌,湯雪明;創(chuàng)傷愈合的細(xì)胞生物學(xué)研究進(jìn)展[J];創(chuàng)傷外科雜志;2000年01期

，

本文編號(hào)：2662321