【摘要】：[目的]探索趨化因子Mig介導口腔舌鱗癌Tca8113細胞耐熱的作用及相關分子機制。 [方法](1)Tca8113細胞常規(guī)培養(yǎng)后,分組處理：Mig處理組(100nM Mig因子處理Tca8113細胞6h),Mig+Akt抑制劑組(100nM Mig+12nM Akt抑制劑MK-2206同時處理Tca8113細胞6h),熱誘導組(43℃80min水浴加熱處理Tca8113細胞),Mig+熱誘導組(100nM Mig處理Tca8113細胞6h后,43℃80min水浴加熱處理Tca8113細胞),Mig+Akt抑制劑+熱誘導組(100nM Mig+12nM Akt抑制劑MK-2206同時處理Tca8113細胞6h后,43℃80min水浴加熱處理Tca8113細胞)。(2) Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片雜交技術檢測Tca8113細胞及Mig處理組、熱誘導處理組和Mig+熱誘導處理組Tca8113細胞相關蛋白磷酸化水平,差異比較,行相關信號通路分析。(3)倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)變化。(4)TUNEL標記流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率。(5)流式細胞儀檢測活化Caspase-3在各組活細胞中的比值及線粒體膜電位。(6)免疫印跡進一步驗證分析相關信號通路蛋白磷酸化水平變化。(7)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。 [結果](1)Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片雜交檢測發(fā)現(xiàn),熱誘導處理Tca8113細胞后,5種蛋白磷酸化水平明顯升高(升高2倍以上)；6種蛋白磷酸化水平明顯降低(降低0.6倍以上)。有意義的是,細胞存活關鍵因子Akt2(Phospho-Ser474)及其下游信號通路轉錄因子eIF4E(Phospho-Ser209)磷酸化水平同時降低,而Mig預處理后再熱誘導,兩者磷酸化水平無明顯降低。(2)熱誘導處理Tca8113細胞24h后,細胞出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學改變,Mig預處理后,其細胞凋亡數(shù)量明顯減少,采用Akt抑制劑MK-2206聯(lián)合處理后,Tca8113細胞凋亡數(shù)量明顯恢復。(3) TUNEL標記流式細胞儀檢測細胞凋亡率,發(fā)現(xiàn)熱誘導處理后Tca8113細胞凋亡率由(2.77±0.47)%升高至(33.97±1.08)%(p=0.000), Mig+熱誘導聯(lián)合處理后細胞凋亡率降至(17.78±2.1)%, Mig+Akt抑制劑+熱誘導聯(lián)合處理后細胞凋亡率恢復為(25.43±0.77)%。(4)熱誘導處理后活化的Caspase-3在所有細胞中的比值由(10.93±1.17)%升高至(49.73±2.04)%(p=0.000), Mig+熱誘導聯(lián)合處理后降至(30.90±2.42)%,Mig+Akt抑制劑+熱誘導聯(lián)合處理后恢復為(44.53±1.59)%。(5)熱誘導處理后Tca8113細胞JC-1單體含量由(10.3±0.92)%升高為(30.5±2.86)%(p=0.000), Mig+熱誘導聯(lián)合處理后降至(16.97±1.53)%, Mig+Akt抑制劑+熱誘導聯(lián)合處理后恢復為(25.34±1.79)%。(6) Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),熱誘導后Tca8113細胞磷酸化Akt2(p-Akt2)(Phospho-Ser474)相對表達量由(0.50±0.09)降為(0.10±0.04)(p=0.000), Mig+熱誘導聯(lián)合處理后恢復為(0.43±0.08), Mig+Akt抑制劑+熱誘導聯(lián)合后降至(0.27±0.04)。熱誘導后Tca8113細胞磷酸化eIF4E(p-eIF4E)(Phospho-Ser209)的相對表達量由(0.45±0.05)降為(0.16±0.02)(p=0.000), Mig+熱誘導聯(lián)合處理后恢復為(0.39±0.04),Mig+Akt抑制劑+熱誘導聯(lián)合處理后降至(0.21±0.04)。熱誘導后Tca8113細胞Bcl-2相對表達量由(1.20±0.06)降為(0.51±0.07)(p=0.000), Mig+熱誘導聯(lián)合處理后恢復為(1.30±0.12), Mig+Akt抑制劑+熱誘導聯(lián)合處理后為(1.03±0.10)。 [結論]趨化因子Mig通過拯救Akt信號通路的活性,促進eIF4E的磷酸化,上調抗凋亡基因Bcl-2的表達,抑制熱誘導口腔舌鱗癌Tca8113細胞凋亡發(fā)生,介導腫瘤細胞耐熱。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.86

【引證文獻】

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1 黎麗;生物多孔介質熱輸運特性的分形分析[D];華中科技大學;2014年

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本文編號：2662138