【摘要】：[目的]探索趨化因子Mig介導(dǎo)口腔舌鱗癌Tca8113細(xì)胞耐熱的作用及相關(guān)分子機(jī)制。 [方法](1)Tca8113細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)后,分組處理：Mig處理組(100nM Mig因子處理Tca8113細(xì)胞6h),Mig+Akt抑制劑組(100nM Mig+12nM Akt抑制劑MK-2206同時(shí)處理Tca8113細(xì)胞6h),熱誘導(dǎo)組(43℃80min水浴加熱處理Tca8113細(xì)胞),Mig+熱誘導(dǎo)組(100nM Mig處理Tca8113細(xì)胞6h后,43℃80min水浴加熱處理Tca8113細(xì)胞),Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)組(100nM Mig+12nM Akt抑制劑MK-2206同時(shí)處理Tca8113細(xì)胞6h后,43℃80min水浴加熱處理Tca8113細(xì)胞)。(2) Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片雜交技術(shù)檢測(cè)Tca8113細(xì)胞及Mig處理組、熱誘導(dǎo)處理組和Mig+熱誘導(dǎo)處理組Tca8113細(xì)胞相關(guān)蛋白磷酸化水平,差異比較,行相關(guān)信號(hào)通路分析。(3)倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化。(4)TUNEL標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。(5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)活化Caspase-3在各組活細(xì)胞中的比值及線粒體膜電位。(6)免疫印跡進(jìn)一步驗(yàn)證分析相關(guān)信號(hào)通路蛋白磷酸化水平變化。(7)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 [結(jié)果](1)Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片雜交檢測(cè)發(fā)現(xiàn),熱誘導(dǎo)處理Tca8113細(xì)胞后,5種蛋白磷酸化水平明顯升高(升高2倍以上)；6種蛋白磷酸化水平明顯降低(降低0.6倍以上)。有意義的是,細(xì)胞存活關(guān)鍵因子Akt2(Phospho-Ser474)及其下游信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子eIF4E(Phospho-Ser209)磷酸化水平同時(shí)降低,而Mig預(yù)處理后再熱誘導(dǎo),兩者磷酸化水平無(wú)明顯降低。(2)熱誘導(dǎo)處理Tca8113細(xì)胞24h后,細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變,Mig預(yù)處理后,其細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少,采用Akt抑制劑MK-2206聯(lián)合處理后,Tca8113細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯恢復(fù)。(3) TUNEL標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,發(fā)現(xiàn)熱誘導(dǎo)處理后Tca8113細(xì)胞凋亡率由(2.77±0.47)%升高至(33.97±1.08)%(p=0.000), Mig+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后細(xì)胞凋亡率降至(17.78±2.1)%, Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后細(xì)胞凋亡率恢復(fù)為(25.43±0.77)%。(4)熱誘導(dǎo)處理后活化的Caspase-3在所有細(xì)胞中的比值由(10.93±1.17)%升高至(49.73±2.04)%(p=0.000), Mig+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后降至(30.90±2.42)%,Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后恢復(fù)為(44.53±1.59)%。(5)熱誘導(dǎo)處理后Tca8113細(xì)胞JC-1單體含量由(10.3±0.92)%升高為(30.5±2.86)%(p=0.000), Mig+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后降至(16.97±1.53)%, Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后恢復(fù)為(25.34±1.79)%。(6) Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),熱誘導(dǎo)后Tca8113細(xì)胞磷酸化Akt2(p-Akt2)(Phospho-Ser474)相對(duì)表達(dá)量由(0.50±0.09)降為(0.10±0.04)(p=0.000), Mig+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后恢復(fù)為(0.43±0.08), Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)聯(lián)合后降至(0.27±0.04)。熱誘導(dǎo)后Tca8113細(xì)胞磷酸化eIF4E(p-eIF4E)(Phospho-Ser209)的相對(duì)表達(dá)量由(0.45±0.05)降為(0.16±0.02)(p=0.000), Mig+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后恢復(fù)為(0.39±0.04),Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后降至(0.21±0.04)。熱誘導(dǎo)后Tca8113細(xì)胞Bcl-2相對(duì)表達(dá)量由(1.20±0.06)降為(0.51±0.07)(p=0.000), Mig+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后恢復(fù)為(1.30±0.12), Mig+Akt抑制劑+熱誘導(dǎo)聯(lián)合處理后為(1.03±0.10)。 [結(jié)論]趨化因子Mig通過(guò)拯救Akt信號(hào)通路的活性,促進(jìn)eIF4E的磷酸化,上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá),抑制熱誘導(dǎo)口腔舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡發(fā)生,介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐熱。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.86

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 黎麗;生物多孔介質(zhì)熱輸運(yùn)特性的分形分析[D];華中科技大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：2662138