【摘要】： 背景: 牙周炎可造成牙齦炎癥、牙周袋形成、牙槽骨吸收以及牙齒松動,最終可導致牙齒脫落。據世界衛(wèi)生組織(WHO)的調查表明牙周病的患病率高達75%,我國某些地區(qū)更高達93%�，F已證實牙菌斑中細菌及其產物是牙周病的始動因子,尤其是齦下菌斑與牙周組織的破壞關系密切。對于牙周病發(fā)生、發(fā)展有關的特異性細菌的控制是牙周病治療的關鍵。在各種治療方法中,激光作為近四十年來發(fā)展起來的一種新型光源,具有普通光源無可比擬的特點:如亮度高、單色性、方向性和相干性好等。從1960年第一臺紅寶石激光問世以來,激光已經被廣泛應用于醫(yī)學的各個領域。在口腔醫(yī)學使用的各類型激光中,Nd:YAG激光的應用最為廣泛。使用脈沖Nd : YAG激光,由光纖傳導進入牙周袋內,光能轉換成熱能,凝固及汽化上皮襯里及部分炎癥浸潤的軟組織。又由于激光被血紅蛋白特異性吸收,膠原纖維蛋白變性及膠原鏈收縮,毛細血管封閉,因而術區(qū)出血少或不出血,術野清楚。激光照射創(chuàng)口甚小,不用切開牙齦和翻瓣,加上激光有電磁場、生物刺激等效應,使術后反應很輕,術后牙齦退縮不明顯,患者樂于接受。然而脈沖Nd:YAG激光治療牙周炎尚缺乏深入、系統(tǒng)的研究。 目的: 本研究首先通過體外實驗比較5種不同劑量脈沖Nd:YAG激光照射對人牙周膜成纖維細胞的增殖作用,選出有效的實驗劑量,為脈沖Nd:YAG激光對慢性牙周炎的治療供重要理論依據。建立慢性牙周炎動物模型,探討5種不同劑量參數脈沖Nd:YAG激光用于牙周炎治療的有效性和安全性,并獲得激光對牙周組織作用的有效方式、激光的適合劑量參數,探討脈沖Nd:YAG激光在臨床應用的適用性和可靠性,以期為該激光在臨床慢性牙周炎治療中的應用提供理論和實驗依據。 材料和方法: 1、HPDLFs的培養(yǎng)、鑒定及不同劑量激光照射對HPDLFs增殖力和形態(tài)的影響酶消化法培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞,利用免疫組化ABC法對原代培養(yǎng)的HPDLFs進行波形絲蛋白和角蛋白多克隆抗體染色,作細胞來源鑒定。取生長良好的第5代HPDLFs,在含10㳠胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h后,1.0W 20pps組、1.5W 20pps組、2.0W 20pps組、2.5W 20pps組和3.0W 20pps組激光照射,正常對照組只進行常規(guī)培養(yǎng),72 h后MTT法用酶標儀檢測各組OD值,評定激光對細胞增殖的影響。將不同激光劑量照射的96孔板HPDLFs ,每孔加入100μl 0.2% TritonX-100 ,考馬斯亮蘭染色,檢測OD值,探討該激光對HPDLFs蛋白含量的影響。取在標準環(huán)境下培養(yǎng)24 h的96孔培養(yǎng)板HPDLFs,根據分組進行激光照射后,每孔加入1μCi3H-TdR,在液閃記數儀上測量每分鐘閃爍記數(cpm),評定激光對HPDLFs DNA合成的影響。 2、將180～220 g,雌雄各半,健康的SD大鼠采用牙頸部結扎法進行建模,8周后隨機取8只模型大鼠和正常大鼠,觀察檢測各項牙周指標,判斷建模是否成功。將建模成功的48只SD大鼠隨機分為6組,另外8只健康SD大鼠作為正常對照組,在牙周潔治的基礎上按照1.0W 20pps、1.5W 20pps、2.0W 20pps、2.5W 20pps、3.0W 20pps實驗劑量給予激光照射。末次治療24 h后處死大鼠,對比各組大鼠的實驗選用牙牙周指標(牙周袋深度PD,菌斑指數PLI,牙齦指數GI )及牙周組織中SOD、MDA、NO水平,驗證脈沖Nd:YAG激光在SD大鼠牙周袋內的治療作用。3、建立慢性牙周炎動物模型,先取24只隨機分為:牙周炎對照組(P組)、激光治療組(L組)、藥物治療組(D)組,另取8只大鼠作為正常對照組(N組)。建模成功后P組、L組、D組進行牙周潔治,L組給予2.0W 20pps劑量激光照射,D組按照200 mg/kg的劑量給SD大鼠灌胃甲硝唑。末次治療24 h后,測量牙周指標并收集實驗選用牙GCF上機檢測,各組間進行比較。治療結束30 d后取實驗選用牙的牙周組織病理切片觀察組織的愈合情況。 結果: 1、酶消化法原代培養(yǎng)HPDLFs,免疫組化染色表明,波形絲蛋白染色陽性,角蛋白染色陰性,這表明為來自中胚層的HPDLFs。經單因素方差分析的結果顯示脈沖Nd:YAG激光劑量為1.0W 20pps-2.0W 20pps時,與正常對照組比較能明顯促進HPDLFs增殖,且激光劑量參數為1.5W 20pps時作用效應最大。N組及1.0W 20pps-2.5W 20pps劑量組蛋白含量明顯高于3.0W 20pps劑量組(P 0. 01),其中2.0 W 20pps劑量組的蛋白含量最高。與N組比較1.0W 20pps-2.5W 20pps劑量組DNA顯著增高, 3.0W 20pps劑量組有所降低(P 0. 01)。 2、在脈沖Nd:YAG激光治療牙周炎動物體內實驗中,激光照射劑量為1.5W 20pps-2.0W 20pps時可使牙周組織SOD活性、MDA含量達到正常水平,NO含量接近于正常對照組的水平。同時在此劑量范圍內在大鼠牙周袋內進行提拉式掃描照射能有效減少牙周袋的深度,降低PLI、GI指數。 3、在脈沖Nd:YAG激光與藥物對比治療慢性牙周炎動物體內實驗中激光組(L組)、藥物組(D組)的牙周各項指標較牙周炎對照組均有所好轉。治療后L組齦溝液中GSH-Px活性高于P組( P 0. 05 ),與N組及D組無顯著性差異( P 0. 05 )。治療后L組齦溝液中ALP活性高于N組低于P組( P 0. 05) ,與D組無顯著性差異( P 0. 05 )。在鏡下,L組與D組相似,與牙周炎組(P組)比較,L、D組牙周軟組織炎癥細胞浸潤明顯減輕,大量成骨細胞生成,牙周袋變淺,牙槽骨破壞處于靜止狀態(tài)。 結論: 1、1.0W 20pps-2.0W 20pps激光劑量照射能促進HPDLFs增殖,提高蛋白質含量,可見脈沖Nd:YAG激光能促進HPDLFs的增殖而起到治療牙周炎的作用。 2、動物體內實驗部分表明激光劑量為1.5W 20pps-2.0W 20pps時對大鼠慢性牙周炎能起到較好的治療效果。綜合實驗各項指標初步確定該激光牙周袋內作用的有效、安全劑量為2.0W 20 pps。 3、激光與藥物治療對比實驗表明2.0W 20 pps劑量激光照射能達到藥物治療的效果,能有效的降低牙周組織的炎癥程度和破壞程度。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R781.4

【參考文獻】

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1 徐燕,李頌,程繼光,胡勇,王明麗;人牙齦成纖維細胞和牙周膜成纖維細胞的培養(yǎng)和生物學特征[J];口腔醫(yī)學研究;2002年06期

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本文編號：2660974