【摘要】： 第一部分:兩種培養(yǎng)基對(duì)狗骨膜細(xì)胞生物學(xué)行為的影響 目的:研究不同培養(yǎng)基對(duì)Beagle犬骨膜細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為牙周組織工程中種子細(xì)胞的培養(yǎng)尋找合適的培養(yǎng)基。方法:取成年Beagle犬頜骨骨膜塊,分別用兩種培養(yǎng)基(DMEM和RPMI1640)對(duì)其組織塊進(jìn)行培養(yǎng),觀察其細(xì)胞游出率、傳代后細(xì)胞增殖能力、堿性磷酸酶活性和礦化結(jié)節(jié)形成能力。分析兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果,比較其對(duì)體外培養(yǎng)的骨膜細(xì)胞影響。結(jié)果:DMEM培養(yǎng)組組織塊細(xì)胞游出率、傳代細(xì)胞增殖能力、堿性磷酸酶活性和礦化結(jié)節(jié)形成能力均高于RPMI1640組。結(jié)論:在DMEM和RPMI1640兩種培養(yǎng)基中,DMEM培養(yǎng)基更適合骨膜細(xì)胞的增殖和成骨分化。 第二部分:β-磷酸三鈣陶瓷對(duì)狗骨膜細(xì)胞生物學(xué)行為的影響 目的:檢測(cè)β-磷酸三鈣陶瓷(β-TCP)對(duì)骨膜細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化特點(diǎn)的影響,探討β-TCP作為牙周組織工程支架材料的可行性。方法:組織塊法培養(yǎng)的骨膜細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)后,接種于β-TCP上培養(yǎng)。通過(guò)MTT、流式細(xì)胞術(shù)和堿性磷酸酶試劑盒檢測(cè)骨膜細(xì)胞的增殖和成骨分化情況,并通過(guò)掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料表面生長(zhǎng)情況。結(jié)果:骨膜細(xì)胞與β-TCP共培養(yǎng)后,仍能維持其增殖能力,在材料表面貼附生長(zhǎng)良好,并保持其成骨分化潛能。結(jié)論:β-TCP適合骨膜細(xì)胞生長(zhǎng)和成骨分化,適合作為牙周組織工程的支架材料。 第三部分:骨膜細(xì)胞移植修復(fù)Beagle犬Ⅲ度根分叉病變的實(shí)驗(yàn)研究 目的:應(yīng)用自體骨膜細(xì)胞移植并結(jié)合膨體聚四氟乙烯(e-PTFE)膜引導(dǎo)牙周組織再生術(shù)(GTR)修復(fù)Beagle犬Ⅲ度根分叉病變,探討其用于牙周組織再生的可行性。方法:人工構(gòu)建4只成年Beagle犬慢性Ⅲ度根分叉病變模型,將24顆受試牙隨機(jī)分成三組,A組:e-PTFE+β-TCP+骨膜細(xì)胞;B組:e-PTFE+β-TCP;C組: e-PTFE,即單純GTR組。每組8顆牙,治療期間不采用任何口腔衛(wèi)生措施。術(shù)后12周取下頜骨標(biāo)本,因各組各有2顆牙在造模過(guò)程或治療過(guò)程中出現(xiàn)根分叉穿孔或牙齦嚴(yán)重退縮,最終各組有6顆牙作組織學(xué)分析,蘇木精-伊紅(HE)染色和Mallory三色法觀察牙周組織再生情況。結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)C組的新生牙骨質(zhì)和牙周膜的長(zhǎng)度分別為3.37±1.21 mm和1.33±0.31 mm,分別占總?cè)睋p長(zhǎng)度的31.67㳠±12.83㳠和17.70㳠±5.35㳠,牙槽骨生成的面積為2.35±1.26 mm2,占總?cè)睋p面積的22.62㳠±7.33㳠;B組的新生牙骨質(zhì)和牙周膜的長(zhǎng)度分別為4.71±1.47 mm和2.34±0.47 mm,分別占總?cè)睋p長(zhǎng)度的43.02㳠±8.08㳠和22.18㳠±5.19㳠,牙槽骨生成的面積為3.71±2.00 mm2,占總?cè)睋p面積的34.77㳠±15.38㳠;A組的新生牙骨質(zhì)和牙周膜的長(zhǎng)度分別為5.53±1.34 mm和3.71±1.82 mm,分別占總?cè)睋p長(zhǎng)度的50.77㳠±8.19㳠和33.64㳠±13.83㳠,牙槽骨生成的面積為6.21±2.18 mm2,占總?cè)睋p面積的60.23㳠±18.16㳠。A組的牙周膜的長(zhǎng)度、新生牙槽骨面積及各自在總?cè)睋p長(zhǎng)度或面積中所占的比例與C組和B組比較,其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí),A組的新生牙骨質(zhì)長(zhǎng)度及在總?cè)睋p長(zhǎng)度中所占的比例與C組比較,其差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:應(yīng)用自體骨膜細(xì)胞移植結(jié)合引導(dǎo)牙周組織再生術(shù)有望促進(jìn)牙周組織缺損的修復(fù)。
【圖文】：

細(xì)胞形態(tài)多為短梭形、長(zhǎng)梭形或三角形。在細(xì)胞培養(yǎng) 20d 左右，組織塊胞密集生長(zhǎng)，鏡下可見(jiàn)較多同心圓狀鈣化小結(jié)節(jié)（見(jiàn)圖 1）。此時(shí)，細(xì)胞原化傳代，傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng)速度較快，形態(tài)無(wú)明顯變化，一般 4d 即可長(zhǎng)滿孔表 1 兩種培養(yǎng)基中原代骨膜細(xì)胞游出率比較組別 培養(yǎng)組織塊數(shù) 細(xì)胞長(zhǎng)出塊數(shù)（游出率%） 細(xì)胞長(zhǎng)出最短時(shí)DMEM 35 31(88.57) 3RPMI1640 28 23(82.14) 3

圖 3 DMEM(A)和 RPMI1640(B)培養(yǎng)基培養(yǎng)骨膜細(xì)胞 15d（Von Kossa 染色 ×100）3 討論牙周支持組織的重建，尤其是牙槽骨的新生，是牙周組織工程研究的重點(diǎn)之一，其首要環(huán)節(jié)是種子細(xì)胞的選擇。已經(jīng)有眾多研究表明，骨膜細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單，體外培養(yǎng)狀態(tài)下表型穩(wěn)定，增殖能力強(qiáng)，具有向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等多種細(xì)胞分化的潛能，因此有望成為牙周組織工程的理想種子細(xì)胞之一[12]。尋找體外擴(kuò)增骨膜細(xì)胞的最佳環(huán)境和條件是組織工程的重要步驟。在國(guó)內(nèi)外研究中，骨膜細(xì)胞多采用 DMEM 培養(yǎng)基，，也有采用 RPMI1640[5]、a-MEM[6]、Ham′s F-12[7]及 Medium199[8]等培養(yǎng)基。但是關(guān)于何種培養(yǎng)基更適合于骨膜細(xì)胞的培養(yǎng)鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較 DMEM 和 RPMI1640 這兩種常用的培養(yǎng)基對(duì)骨膜細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，以確定適宜骨膜細(xì)胞體外生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。RPMI1640 培養(yǎng)基最初是針對(duì)淋巴細(xì)胞設(shè)計(jì)的，具有成分簡(jiǎn)單、氨基酸含量
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R781.4

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 鐘泉;hPDGF-B基因修飾的組織工程化復(fù)合物修復(fù)牙周組織缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 趙欣;不同濃度骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)牙周組織再生影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

2 高翔;低強(qiáng)度脈沖超聲波聯(lián)合自體骨移植或GBR治療對(duì)Beagle犬牙周組織修復(fù)作用的初步探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2657362