【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?種植體周圍炎是一種類似于牙周炎的口腔慢性炎癥性疾病,在疾病的發(fā)展過程中伴有巨噬細(xì)胞的極化。巨噬細(xì)胞是機(jī)體重要的防御細(xì)胞,在不同的刺激因素的作用下,巨噬細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)出兩種具有不同表型和生理功能的分化狀態(tài)。M1型巨噬細(xì)胞可釋放IL-1、TNF-α、i NOS等炎性細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子賦予M1巨噬細(xì)胞強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性及組織損傷性,在殺滅病原微生物的同時(shí),也會(huì)造成結(jié)締組織的降解和骨組織的破壞吸收;M2型巨噬細(xì)胞則可釋放IL-10、Arg-1等抗炎細(xì)胞因子,可促進(jìn)機(jī)體損傷組織的修復(fù)重建。槲皮素屬于黃酮醇類化合物,具有抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)的目的在于初步探究槲皮素是否對(duì)巨噬細(xì)胞的極化具有調(diào)控作用,能否通過抑制巨噬細(xì)胞的M1型極化,進(jìn)而減少炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放,為實(shí)現(xiàn)抑制種植體周圍炎的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法:1.Real-time PCR法檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌內(nèi)毒素刺激RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞24h時(shí)后,i NOS及Arg-1m RNA的相對(duì)表達(dá)水平。2.槲皮素預(yù)處理RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞2h后,Real-time PCR法檢測(cè)i NOS及Arg-1m RNA的相對(duì)表達(dá),ELISA法檢測(cè)TNF-α及IL-10的表達(dá)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用Graph Pad Prism軟件,單因素方差分析法分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.牙齦卟啉單胞菌內(nèi)毒素刺激RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞24h后,i NOS的m RNA表達(dá)顯著增加,而Arg-1的m RNA表達(dá)微量增加,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.槲皮素預(yù)處理RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞2h后,i NOS的m RNA及TNF-α的表達(dá)均顯著降低,而Arg-1的m RNA及IL-10的表達(dá)水平均沒有顯著性變化。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)證實(shí)了槲皮素通過抑制P.g LPS激活的RAW264.7向M1極化,減少了炎性細(xì)胞因子的釋放。
【圖文】：

的P.g LPS刺激24h后，其細(xì)胞活性明顯下降。而1ug/ml的P.g LPS是引起細(xì)胞活性顯著降低的濃度的千分之一，所以我們實(shí)驗(yàn)選擇1ug/ml作為P.g LPS對(duì)RAW264.7細(xì)胞系的最適濃度（圖3.1）。圖 3.1 不同濃度的 P.g LPS 對(duì) RAW264.7 巨噬細(xì)胞在 24h 時(shí)的細(xì)胞活性影響(**P<0.01VS 對(duì)照組)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，P.g LPS刺激RAW264.7細(xì)胞24h后，iNOS基因的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高；而Arginase-1基因的表達(dá)水平較對(duì)照組僅有微量升高（圖3.2）。

圖 3.2 P.g 刺激 RAW264.7 巨噬細(xì)胞后 iNOS、Arginase-1 的 mRNA 表達(dá)(***P<0.001 VS 對(duì)照組)3.2 在槲皮素預(yù)處理 RAW264.7 巨噬細(xì)胞后，P.g LPS 激活的RAW264.7 巨噬細(xì)胞 iNOS、TNF-α、Arg-1 及 IL-10 的表達(dá)CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，槲皮素在75uM時(shí)細(xì)胞活性明顯下降，而50uM是槲皮素對(duì)RAW264.7細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性的最大濃度（圖3.3），，所以，我們實(shí)驗(yàn)采用50uM作為槲皮素對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞系的最適濃度。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R783.6

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本文編號(hào)：2648082