【摘要】：目的： 口腔牙齦是牙周支持組織之一，主要由成纖維細(xì)胞組成。國(guó)內(nèi)外許多研究證明，人體內(nèi)的成纖維細(xì)胞具有干細(xì)胞特征~[1-4]。正常情況下，牙齦組織具有極強(qiáng)的修復(fù)功能，其修復(fù)活動(dòng)是通過牙齦中成纖維細(xì)胞不同細(xì)胞亞群的定向遷移和分化實(shí)現(xiàn)的~[5,6]。 口腔的基本生理功能如咀嚼、發(fā)音和面部表情運(yùn)動(dòng)都需要骨骼肌的收縮功能來完成。由于肌細(xì)胞再生能力很弱，肌肉損傷后，通常由成纖維細(xì)胞形成的肉芽組織充填，瘢痕修復(fù)。因此，如果能使成纖維細(xì)胞向骨骼肌細(xì)胞方向分化，可以減少瘢痕的形成，為骨骼肌細(xì)胞的再生提供了新的細(xì)胞來源。本研究擬采用體外培養(yǎng)牙齦成纖維細(xì)胞，使其誘導(dǎo)分化為骨骼肌樣細(xì)胞，探討牙齦成纖維細(xì)胞向骨骼肌細(xì)胞分化的潛能和可能性。 方法： 1.人牙齦成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定。 收集河北醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院口腔頜面外科下頜阻生齒拔出后切除的牙齦組織。采用組織塊培養(yǎng)法，培養(yǎng)液選用含20%胎牛血清的低糖DMEM，0.25%胰酶?jìng)鞔�，采用波形蛋白（vimentin）和骨骼肌肌動(dòng)蛋白（α-sarcometric actin）肌球蛋白（myosin）的免疫細(xì)胞化學(xué)、Masson特殊染色進(jìn)行鑒定。 2.人牙齦成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)。 采用含10%胎牛血清DMEM/F12混合培養(yǎng)液，應(yīng)用5-氮雜胞苷（azacytidine,5-aza）聯(lián)合成肌分化因子（myogenic differentiation factor,Myod）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（insulin-like growth factors-1, IGF-1）對(duì)第3代人牙齦成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)38天，采用vimentin和α-sarcometricactinmyosin的免疫細(xì)胞化學(xué)、Masson特殊染色進(jìn)行鑒定。掃描電鏡觀察骨骼肌樣細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。 結(jié)果： 1.人牙齦成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定。 牙齦組織原代培養(yǎng)7~10天，細(xì)胞爬出，成纖維細(xì)胞呈梭形、胞體大，核大，，圓形或橢圓形，有1~3個(gè)核仁。第3代細(xì)胞波形蛋白陽(yáng)性。 2.人牙齦成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)及鑒定。 經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)38天的細(xì)胞，在倒置顯微鏡及掃描電鏡下，形態(tài)變?yōu)殚L(zhǎng)圓柱狀或棒狀，胞漿兩端突起消失，細(xì)胞核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，骨骼肌樣細(xì)胞對(duì)α-sarcometric actinmyosin呈陽(yáng)性表達(dá)，Masson染色胞漿著紅色。呈現(xiàn)骨骼肌樣細(xì)胞的形態(tài)和免疫特征。 結(jié)論：人牙齦成纖維細(xì)胞能夠誘導(dǎo)分化為骨骼肌樣細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R780.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2643107