【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)激光共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察厚樸酚對(duì)體外變形鏈球菌生物膜的作用效果，并初步了解厚樸酚對(duì)變形鏈球菌生物膜的產(chǎn)酸、耐酸、胞外多糖形成及生物膜形成能力等相關(guān)致齲毒力因子的轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響，為進(jìn)一步研究厚樸酚防齲的藥理作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法:首先在蓋玻片上建立變形鏈球菌生物膜體外模型，經(jīng)不同藥物濃度作用后,分別加入吖啶橙/溴化乙錠（AO/EB）染色，在激光共聚焦顯微鏡觀察并進(jìn)行紅綠熒光定量分析；根據(jù)GenBank基因庫(kù)查詢ffh、gtfD、pdp等基因序列并設(shè)計(jì)引物,RT-PCR方法測(cè)定變形鏈球菌生物膜致齲毒力因子ffh、gtfD和pdp基因片段受不同藥物濃度作用后基因表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：CLSM觀察厚樸酚作用于已形成的24h細(xì)菌生物膜后，，實(shí)驗(yàn)組綠色熒光面積隨著藥物濃度的增加而減少，與對(duì)照組相比各藥物濃度均明顯降低了細(xì)菌生物膜的生長(zhǎng)活性,膜內(nèi)活菌比例明顯下降；通過(guò)電泳凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)分析,在梯度藥物濃度作用并保證細(xì)菌模板量一致的情況下，毒力因子ffh、gtfD、pdp等的基因片段在電泳檢測(cè)條帶上的亮度依次變暗甚至消失，說(shuō)明厚樸酚在一定濃度下能夠使變形鏈球菌生物膜毒力因子的基因表達(dá)量呈明顯下降趨勢(shì)。 結(jié)論：厚樸酚對(duì)變形鏈球菌生物膜的生長(zhǎng)活性有良好的抑制作用，并且能抑制其致齲毒力因子ffh、gtfD、pdp等基因片段的mRNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá),由此可以推斷厚樸酚對(duì)變形鏈球菌生物膜生長(zhǎng)的影響是由于其抑制或干擾了某些基因片段的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而導(dǎo)致生物膜結(jié)構(gòu)受到破壞。
【圖文】：

圖 1 厚樸酚的分子結(jié)構(gòu)圖酚對(duì)人體有很高的安全性,并已通過(guò) FDA(美國(guó)酚主要被應(yīng)用在臨床醫(yī)藥行業(yè);也被研究應(yīng)用膚品中;應(yīng)用到多種抗菌治療藥物中[33]-[34]。提取方法法粗粉，加入 5 ～10 倍量的水,除去揮發(fā)油，加, 置室溫 24 h 后離心過(guò)濾，乙醚反復(fù)萃取其濾溶液洗滌 、干燥過(guò)濾，揮去醚層可見(jiàn)結(jié)晶，約 4% 。有報(bào)道稱厚樸酚在堿性環(huán)境中溶出沉法粗粉，加入 20 %的生石灰粉，攪拌均勻后加入

生物膜內(nèi)的細(xì)菌也由大的團(tuán)片變成散在的鏈狀結(jié)構(gòu)。說(shuō)明在高濃度藥物作用下,生物膜內(nèi)的死菌增多,并且生物膜結(jié)構(gòu)受到破壞.圖示如下（2～8）:圖2 陰性對(duì)照組 CLSM×200
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2631591