【摘要】：腭板的發(fā)生是一個十分復(fù)雜的生物學(xué)過程,包含著腭板的垂直生長,抬升,水平生長并融合的過程,由不同信號通路的信號分子以及多種轉(zhuǎn)錄因子所組成的巨大的分子信號網(wǎng)絡(luò)所調(diào)控。而這個網(wǎng)絡(luò)體系中重要基因的缺失或突變,經(jīng)常會導(dǎo)致腭裂的發(fā)生。唇腭裂是最常見的新生出生缺陷,研究唇腭裂的發(fā)生機制對唇腭裂的預(yù)防以及人口素質(zhì)的提升有重要的意義。Msx1(肌節(jié)同源盒基因)編碼的Msx1蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子,多表達在上皮與間充質(zhì)相互作用的部位,是重要的唇腭裂易感性基因。人類MSX1基因突變會導(dǎo)致唇腭裂的發(fā)生,在小鼠中敲除Msx1基因也會導(dǎo)致唇腭裂。目前已有Msx1敲除小鼠模型,為研究Msx1在腭板發(fā)育過程中的基因功能提供了條件。然而,作為一個轉(zhuǎn)錄因子,有關(guān)Msx1在腭板發(fā)育過程中的靶基因知道的還比較少。因此我們實驗室構(gòu)建出Msx1條件性過表達小鼠模型(RosaMsx1~(fx/fx))來尋找Msx1在腭板發(fā)育過程中的靶基因,并結(jié)合MSx1敲除小鼠模型,來深入研究Msx1的功能。目前我們已經(jīng)取得了一系列結(jié)果。首先,利用免疫熒光和原位雜交實驗確定了Msx1小鼠模型構(gòu)建的成功。接著,我們使用Wnt1-Cre來和Msx1條件性過表達小鼠交配,使Msx1在小鼠腭板的間充質(zhì)細胞中過表達,并觀察Msx1過表達小鼠表型。我們發(fā)現(xiàn)Msx1過表達的小鼠具有腭裂表型。接下來,我們通過RNAseq找到在Msx1過表達小鼠和野生型小鼠胚胎E12.5時期的腭板中差異表達的基因。我們發(fā)現(xiàn)Msx1的過表達會導(dǎo)致腭板多種基因的表達發(fā)生變化。其中,幾個腭板發(fā)育的關(guān)鍵基因,例如:Satb2,Barx1,Alx1的表達都有明顯的變化。由于這幾個基因的缺失都會導(dǎo)致唇腭裂,因此,我們進一步使用原位雜交檢測了這些基因在Msx1過表達小鼠,Msx1敲除小鼠以及野生型小鼠腭板發(fā)育中的表達情況。我們發(fā)現(xiàn)原位雜交實驗結(jié)果和RNAseq數(shù)據(jù)相互驗證,并且每個基因在過表達小鼠和敲除小鼠表達水平變化相反。我們進一步研究發(fā)現(xiàn),Satb2和Alx1的基因的啟動子區(qū)域都有Msx1的結(jié)合位點,很有可能是Msx1的靶基因。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果提示,Msx1對Alx1和Satb2的表達具有調(diào)控作用。Barx1的啟動子區(qū)域沒有發(fā)現(xiàn)Msx1的結(jié)合位點,可能受到Msx1的間接調(diào)控,也可能是Msx1結(jié)合到增強子區(qū)域?qū)ζ浔磉_進行調(diào)控。因此,通過本課題的研究,我們找到了幾個可能的Msx1的靶基因,為Msx1在腭板發(fā)育過程中的分子功能研究提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
【圖文】：

1通過免疫熒光檢測Rosa-Flag-Msx1是否構(gòu)建成功

找出RosaMsx1Wnt1-cre的表型
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R782.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李珊珊;肖晶;;Wnt家族基因敲除小鼠胚胎發(fā)育異常的研究現(xiàn)狀[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2008年06期

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本文編號：2622185