【摘要】： 因創(chuàng)傷、感染、腫瘤及先天性疾病等造成的頜骨缺損十分常見(jiàn)，深入探討其再生修復(fù)的分子機(jī)制具有重要意義。與軀干四肢骨骼來(lái)源于中胚層間充質(zhì)不同，顱頜面骨發(fā)生于顱神經(jīng)嵴源外胚間充質(zhì)，具有獨(dú)特的膜內(nèi)成骨機(jī)制，外胚間充質(zhì)在成骨向分化中表現(xiàn)出不同的Hoxa2(homeobox a2，Hoxa2)基因活動(dòng)特點(diǎn)，Hoxa2在顱頜面骨發(fā)生中未發(fā)現(xiàn)表達(dá)，但在軀干四肢骨中呈陽(yáng)性表達(dá)，外源性Hoxa2可致下頜骨轉(zhuǎn)型為舌骨。由此提示，成體頜骨與軀干四肢骨在組織再生修復(fù)機(jī)制方面可能存在差異。本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠頜骨及脛骨缺損自限性愈合模型的基礎(chǔ)上，采用組織形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)、RT-PCR等方法分別對(duì)其缺損區(qū)愈合骨痂中Hoxa2基因表達(dá)進(jìn)行比較分析，初步探討頜骨獨(dú)特的再生修復(fù)機(jī)制。 方法：取20只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分成5組，每組4只。于大鼠左側(cè)下頜骨及脛骨各制備約4mm大小的缺損，作為實(shí)驗(yàn)組，另一側(cè)作為對(duì)照組。術(shù)后3天、7天、10天、14天、21天各處死一組動(dòng)物，分別取出下頜骨及脛骨缺損區(qū)愈合骨痂用于組織學(xué)檢測(cè)及RT-PCR。用10％多聚甲醛固定，10％EDTA脫鈣，石蠟包埋后切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色及Hoxa2抗體免疫組織化學(xué)染色；提取缺損處骨痂及對(duì)照骨組織總RNA，以Hoxa2 mRNA第636-880堿基序列設(shè)計(jì)引物，β-actin為內(nèi)參，采取RT-PCR擴(kuò)增，檢測(cè)Hoxa2 cDNA表達(dá)。 結(jié)果：術(shù)后7天，組織學(xué)上見(jiàn)到骨缺損區(qū)新骨形成；術(shù)后14天，缺損區(qū)已基本被新骨代替，但與原正常骨仍有界限；術(shù)后21天與正常骨組織無(wú)明顯界限。所有實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組脛骨組織均擴(kuò)增出片段長(zhǎng)度為245bp的目的基因條帶，為Hoxa2 cDNA基因片段，半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組表達(dá)增強(qiáng)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異(p＜0.001)；所有實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組頜骨組織均未擴(kuò)增出Hoxa2 cDNA目的基因條帶。免疫組織化學(xué)分析對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組脛骨均可在細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)Hoxa2分子表達(dá)陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)明顯增強(qiáng)；對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組頜骨均未發(fā)現(xiàn)Hoxa2分子表達(dá)。 結(jié)論：1)大鼠下頜骨及脛骨4mm大小的缺損能夠自行骨性愈合。2) Hoxa2在頜骨再生修復(fù)中不表達(dá)，而在脛骨骨再生修復(fù)中表達(dá)增強(qiáng)，提示頜骨再生修復(fù)可能存在獨(dú)特的分子調(diào)控機(jī)制。
【圖文】：

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文擾，嚴(yán)密縫合關(guān)閉創(chuàng)口(圖1、2)。3)脛骨缺損的制備:將大鼠左腿外旋，在脛骨內(nèi)側(cè)備皮，消毒后，切開(kāi)皮膚，皮下組織及肌層，暴露脛骨上端，在此制備同樣大小的骨缺損，欽膜覆蓋固定后，分層縫合。4)清醒后送返動(dòng)物房(南京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)，采取普通環(huán)境飼養(yǎng)，，術(shù)后連續(xù)三天以抗生素棉球擦拭傷口，預(yù)防感染。5)分別于術(shù)后第3天、7天、10天、14天、21天各處死4只大鼠，處死后解剖出手術(shù)側(cè)及對(duì)照側(cè)下領(lǐng)骨及脛骨。四、標(biāo)本處理進(jìn)行大體標(biāo)本觀察后用10%中性多聚甲醛固定24小時(shí)，然后用10%EDTA液脫鈣5周

圖2術(shù)后第3天領(lǐng)骨標(biāo)本Fig.1thesamPleofjawboneonday3PostoPeration2一l，exPerimentalgrouP:2一2，eontrolgrouP三、組織學(xué)觀察術(shù)后3天見(jiàn)缺損中心充滿(mǎn)大量血細(xì)胞，邊緣可見(jiàn)極少的未成熟新骨形成，成纖維細(xì)胞增生，炎癥細(xì)胞已有所減少(圖3、4);術(shù)后7天邊緣新骨增多，高倍鏡下可見(jiàn)越靠近缺損邊緣，新生骨的成熟程度越高，成骨細(xì)胞分化明顯，但數(shù)量較少(圖5、6);術(shù)后10天見(jiàn)缺損中央血管豐富，邊緣新骨增多，可在脛骨邊緣見(jiàn)軟骨細(xì)胞及成層排列的成骨細(xì)胞，而領(lǐng)骨中未見(jiàn)軟骨細(xì)胞(圖7、8);術(shù)后14天缺損
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R782;R683

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本文編號(hào)：2621260