【摘要】：鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面部惡性腫瘤中一種常見的病理類型,約占90%,而在口腔鱗癌中,最常見類型的其中之一就是舌鱗狀細(xì)胞癌。治療舌鱗狀細(xì)胞癌,目前主要采取綜合手術(shù)療法、放射療法、化學(xué)療法及生物療法等各種治療方法的序列治療方案,盡管取得一定的近期效果,但是遠(yuǎn)期治療效果仍不是十分理想,因該方案并沒有從根本上解決術(shù)后復(fù)發(fā)及癌瘤轉(zhuǎn)移等臨床腫瘤治療中的主要難題。 近年來,隨著對腫瘤研究的不斷深入,學(xué)者發(fā)現(xiàn)某些腫瘤細(xì)胞與干細(xì)胞具有相似的生長調(diào)控機制,腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells, CSC)的理論隨之誕生。該理論認(rèn)為：腫瘤組織中存在少量干細(xì)胞樣的癌細(xì)胞亞群,具有自我更新、多向分化及強增殖能力,能夠分化為構(gòu)成腫瘤的大部分細(xì)胞,并使腫瘤具有異質(zhì)、增殖、浸潤等特性,這一細(xì)胞亞群被稱為：腫瘤干細(xì)胞。雖然它們只占腫瘤的一小部分,卻是腫瘤起源、生長、轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的根源所在。腫瘤干細(xì)胞理論的提出開啟了腫瘤治療領(lǐng)域的新紀(jì)元,突破了傳統(tǒng)癌癥治療的本質(zhì)觀念。通過對其生物學(xué)特性的研究并建立相應(yīng)的實驗?zāi)Ｐ?尋找靶向腫瘤干細(xì)胞的抗癌策略,以根治腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,成為研究的熱點。其中,選擇何種細(xì)胞表面標(biāo)志物來證實腫瘤干細(xì)胞的存在并完成對腫瘤干細(xì)胞的提取和鑒別是首要亟待解決的問題。 p75神經(jīng)營養(yǎng)蛋白受體(p75neurotrophin receptor, p75NTR)是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子的低親和力受體,分子量為75kDa。是腫瘤壞死因子受體超家族的成員。在體內(nèi),p75NTR可通過不同的信號傳導(dǎo)通路誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生增殖、分化、遷移、凋亡等生物學(xué)行為。研究表明,其實現(xiàn)這一復(fù)雜生物學(xué)活性主要通過兩種途徑：①與Trks受體的相互調(diào)節(jié)作用；②參與促進細(xì)胞存活或凋亡的自主信號的啟動及調(diào)控作用。近年來,研究發(fā)現(xiàn)p75NTR的表達與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展相關(guān),并已證實其在全身多種腫瘤中是可以作為一種腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)志物。 鑒于此,本實驗通過研究p75神經(jīng)營養(yǎng)因子受體(p75NTR)在舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系Tca-8113及Cal-27中的表達,并采用流式細(xì)胞分選技術(shù)對舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系Tca-8113及Cal-27以p75NTR為標(biāo)志進行分選,進一步對其分選得到的p75NTR陽性癌細(xì)胞進行生物學(xué)特性研究等,探討p75N'TR作為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物和預(yù)測口腔鱗狀細(xì)胞癌愈后指標(biāo)的可能性,為深入研究舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病機理和尋找新的治療靶點提供線索。 第一部分舌鱗癌細(xì)胞系單細(xì)胞體外增殖及p75NTR的表達 目的：研究p75NTR在舌鱗癌細(xì)胞系中的表達,并觀察舌鱗癌Cal-27細(xì)胞系的單細(xì)胞體外增殖能力,尋找腫瘤干細(xì)胞存在的依據(jù),探尋以p75NTR作為舌鱗癌干細(xì)胞膜蛋白標(biāo)志進行實驗研究的可行性。 方法：對舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系Tca-8113和Cal-27進行流式細(xì)胞檢測,檢測癌細(xì)胞中p75NTR的表達。并對Cal-27細(xì)胞進行體外單克隆培養(yǎng),觀察Cal-27的增殖、分裂特性。并應(yīng)用SPSS13.0軟件,采用X2檢驗進行分析。 結(jié)果：p75NTR在舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中有陽性表達,百分比大約為3.1%(Tca-8113)和1.9%(Cal-27)。體外單克隆八天后,Cal-27細(xì)胞中仍有繼續(xù)增殖能力的細(xì)胞孔數(shù)占開始時細(xì)胞總量的13.8%；十二天后,這一比例降至4.4%；十六天后,僅有3.7%的細(xì)胞孔數(shù)繼續(xù)分裂增殖。 結(jié)論：舌鱗癌細(xì)胞系Cal-27具有異質(zhì)性,只有微量細(xì)胞具有持續(xù)的分裂增殖能力,同時僅有極少量細(xì)胞呈p75NTR陽性表達,該結(jié)果提示p75NTR具有被作為腫瘤干細(xì)胞特異性表面標(biāo)志物的可能性。但其在舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病過程中所起的作用及機制,及其與舌鱗狀細(xì)胞癌中腫瘤干細(xì)胞的確切關(guān)系仍有待于我們進一步的研究。 第二部分p75NTR陽性舌鱗癌細(xì)胞的生物學(xué)特征性相關(guān)研究 目的：通過對舌鱗癌細(xì)胞系流式細(xì)胞儀分選獲得的p75NTR陽性細(xì)胞進行生物學(xué)特性研究,探尋p75NTR陽性細(xì)胞是否具有腫瘤干細(xì)胞的特性。 方法：通過流式細(xì)胞儀分選獲取p75NTR陽性舌鱗癌細(xì)胞,進行增殖能力、自我更新、多項分化能力和成瘤能力的檢測：1.免疫細(xì)胞化學(xué)檢測p75NTR陽性舌鱗癌細(xì)胞中CD44的表達；2.對p75NTR陽性和未分選舌鱗癌細(xì)胞進行單克隆培養(yǎng),培養(yǎng)14天后比較其單克隆能力,收集p75NTR陽性舌鱗癌細(xì)胞形成單克隆的細(xì)胞正常培養(yǎng)兩周,檢測其p75NTR陽性比例；3.MTT實驗比較p75NTR陽性和未分選的舌鱗癌細(xì)胞生長情況,并繪制細(xì)胞生長曲線；4.劃痕實驗比較p75NTR陽性和未分選的舌鱗癌細(xì)胞遷移能力；5,體內(nèi)成瘤實驗對比p75NTR陽性和未分選的舌鱗癌細(xì)胞成瘤能力。 結(jié)果：CD44在舌鱗癌細(xì)胞系Tca-8113和Cal-27的p75NTR陽性細(xì)胞中高表達,所占比例大約為50%。在舌鱗癌細(xì)胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR陽性細(xì)胞與未分選的對照組細(xì)胞相比,p75NTR陽性細(xì)胞的單克隆形成能力較同源的未分選的對照組細(xì)胞的單克隆形成能力相比均顯著增高(P0.01)；單克隆化后的p75NTR陽性細(xì)胞再培養(yǎng)兩周后,檢測到大量p75NTR陰性細(xì)胞,p75NTR+細(xì)胞的比例下降到14.5%和5.8%；MTT實驗證明p75NTR陽性細(xì)胞生長均較迅速(P0.01)；同時相對于未分選的細(xì)胞具有更強的遷移能力；p75NTR陽性細(xì)胞與未分選的對照組細(xì)胞相比,裸鼠體內(nèi)致瘤能力無顯著統(tǒng)計學(xué)意義,但p75NTR陽性細(xì)胞組成瘤速度快。結(jié)論：p75NTR陽性細(xì)胞具有較強的增殖能力、遷移能力、自我更新和分化能力以及較快的成瘤能力,且能夠在產(chǎn)生的子代細(xì)胞中保持其細(xì)胞特性,并能分化產(chǎn)生其它表型的細(xì)胞(p75NTR陰性細(xì)胞)。說明p75NTR陽性舌鱗癌細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞的特性。為進一步研究舌鱗癌干細(xì)胞提供了一種有效的方法和途徑,也為我們進一步從腫瘤干細(xì)胞角度研究舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病機理和尋找新的治療靶點提供了線索。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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本文編號：2617213