【摘要】： 目的：制備人重組胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ明膠微球(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰgelatin microspheres, rhIGF-Ⅰ-GMs),觀察其一般性質(zhì)、體外釋藥特性及其對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblasts, HPDLFs)的增殖及合成Ⅰ型膠原的影響。從而初步探討rhIGF-Ⅰ-GMs對(duì)rhIGF-Ⅰ的緩釋作用,及其對(duì)HPDLFs作用的時(shí)間和濃度效果,為其在牙周組織工程中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：用改良乳化冷凝聚合法制備rhIGF-Ⅰ-GMs,掃描電鏡(scanning microscope,SME)觀察其一般性質(zhì)；rhIGF-Ⅰ-ELISA試劑盒測(cè)定rhIGF-Ⅰ的含量,計(jì)算微球包封率和載藥率及繪制微球體外釋藥曲線。取第4代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HPDLFs用于實(shí)驗(yàn)。將制備好的rhIGF-Ⅰ-GMs作用于HPDLFs,實(shí)驗(yàn)分為三組:rhIGF-Ⅰ-GMs組(加入rhIGF-Ⅰ-GMs,依據(jù)微球含rhIGF-Ⅰ相對(duì)于培養(yǎng)液(Dubecco's modified eagle medium, DMEM)的終濃度再分為1,5,10,50和10μg/L5個(gè)濃度組)、rhIGF-Ⅰ組(加入rhIGF-Ⅰ,依據(jù)rhIGF-Ⅰ相對(duì)于DMEM的終濃度再分為1,5,10,50和10μg/L5個(gè)濃度組)和對(duì)照組(不加rhIGF-Ⅰ),用四唑鹽比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)和羥脯氨酸試劑盒(消化法)動(dòng)態(tài)觀察其對(duì)HPDLFs增殖及合成Ⅰ型膠原的影響。 結(jié)果：(1)所制備的微球表面光滑圓整,球體均勻度好,平均粒徑為(12.51±3.53)μm,凍干粉劑為黃白色粉末狀,再分散性良好,微球載藥量和包封率分別為920ng/g和92.0%,體外7d內(nèi)藥物緩釋72.5%,35d可降解；(2)HPDLFs呈星形或長(zhǎng)梭形,核呈圓形或卵圓形,有2-4個(gè)胞漿突起,核仁清晰可見,呈漩渦狀、柵欄狀、放射狀外觀生長(zhǎng),為典型的成纖維樣細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞活性好；(3)rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs均明顯促進(jìn)HPDLFs增殖及合成Ⅰ型膠原的效果(P0.05),rhIGF-Ⅰ-GMs較單獨(dú)應(yīng)用rhIGF-Ⅰ的效果更加顯著(P0.05),呈濃度及時(shí)間依賴性。 結(jié)論：rhIGF-Ⅰ-GMs凍干粉劑制備良好；rhIGF-Ⅰ-GMs在7d內(nèi)對(duì)rhIGF-Ⅰ有良好的緩釋作用；HPDLFs形態(tài)和活性良好可以用于實(shí)驗(yàn)研究；rhIGF-Ⅰ-GMs與HPDLFs有良好的生物相容性,且促進(jìn)HPDLFs增殖及合成Ⅰ型膠原的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用rhIGF-Ⅰ。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R780.2

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本文編號(hào)：2610315