【摘要】：目的 1、初步探討納米羥基磷灰石懸浮液對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的作用,為納米羥基磷灰石應(yīng)用于牙周病的治療提供依據(jù)。 2、為本課題組今后研究納米及介孔材料載藥后對(duì)相關(guān)成纖維細(xì)胞的凋亡影響做準(zhǔn)備。 方法 1.利用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)、鑒定并傳代人牙周膜成纖維細(xì)胞,利用第4-6代成纖維細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 2.實(shí)驗(yàn)室制備納米羥基磷灰石,利用羧甲基纖維素鈉、六偏磷酸鈉作為分散劑,進(jìn)行對(duì)比,觀察兩種分散劑對(duì)納米羥基磷灰石的分散效果,并進(jìn)行簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng),對(duì)比細(xì)胞生長(zhǎng)情況,選擇合適的分散劑。 3.采用分散劑對(duì)納米羥基磷灰石進(jìn)行分散,制備l%濃度的納米羥基磷灰石懸浮液,分別稀釋至0.5%、0.25%、0.1%、0.05%、0.025%,并設(shè)置單獨(dú)0.1%濃度的納米羥基磷灰石組、單獨(dú)0.1%濃度的羧甲基纖維素鈉組、0.005%介孔硅組、0.01%氫氧化鈣組及空白對(duì)照組,對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞各培養(yǎng)24h、48h、72h后,用MTT法對(duì)各組細(xì)胞增殖情況進(jìn)行測(cè)定,評(píng)價(jià)各組對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的影響。 4.選取0.5%濃度的懸浮液與各對(duì)照組繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)48h,將各組培養(yǎng)后的細(xì)胞,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布情況,分析各組對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期影響。 結(jié)果 1.成功培養(yǎng)出人牙周膜成纖維細(xì)胞,經(jīng)抗波形絲蛋白、抗角蛋白染色確定：抗波形絲蛋白陽(yáng)性,抗角蛋白陰性。 2.實(shí)驗(yàn)室采用化學(xué)沉淀法制備出納米羥基磷灰石,經(jīng)粒徑檢測(cè)所得納米羥基磷灰石粒徑在20-40 nm符合本次實(shí)驗(yàn)所需。通過比較六偏磷酸鈉和羧甲基纖維素鈉的對(duì)納米羥基磷灰石的分散效果,可以得出六偏磷酸鈉能更好地分散納米羥基磷灰石,但進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),采用六偏磷酸鈉分散納米羥基磷灰石進(jìn)行培養(yǎng)卻導(dǎo)致了大量人牙周膜成纖維細(xì)胞的死亡,而羧甲基纖維素鈉分散的納米羥基磷灰石組細(xì)胞生長(zhǎng)良好。因此選用羧甲基纖維素鈉作為分散劑配置納米羥基磷灰石懸浮液,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 3.MTT法檢測(cè)不同濃度的分組以及多重對(duì)照組的細(xì)胞增殖情況,發(fā)現(xiàn)0.5%濃度的納米羥基磷灰石懸浮液組對(duì)細(xì)胞增殖情況較其他組效果明顯。在相同濃度(0.1%)下,納米羥基磷灰石懸浮液組對(duì)細(xì)胞的增殖作用優(yōu)于單獨(dú)納米羥基磷灰石組。 4.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示納米羥基磷灰石懸浮液組可以減少處于G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量,增加處于S期的細(xì)胞數(shù)量,使人牙周膜成纖維細(xì)胞在細(xì)胞增殖周期中很快完成G0/G1,期向s的過渡。 結(jié)論 1.納米羥基磷灰石懸浮液對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用。在細(xì)胞培養(yǎng)允許的滲透濃度內(nèi),濃度越高對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用越明顯,而且納米羥基磷灰石對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用在前24h最為明顯。 2.納米羥基磷灰石懸浮液作用于人牙周膜成纖維細(xì)胞,可以縮短細(xì)胞處于Go/G1,的時(shí)間,使較大量的細(xì)胞進(jìn)入S期,進(jìn)行有絲分裂,加速了HPDLCs的增殖速度。 3.通過本研究,進(jìn)一步肯定了nHA運(yùn)用于牙周軟組織重建的可能,為nHA運(yùn)用于牙周病的治療提供了參考依據(jù)。
【圖文】：

0025%0.05%of%025%0石、圖4.1不同混合濃度在不同時(shí)間的增殖趨勢(shì)上圖所示，nHA一CMCNa組在不同的濃度下，nHA濃度越高，對(duì)細(xì)胞增殖用越明顯。從圖中增殖斜率可以看出，24h斜率最大，48h斜率基本位72h之間，72h時(shí)，細(xì)胞相對(duì)增值率的斜率較24h和72h低平。因此可

圖4.2nHA、CMCNa單獨(dú)及混合狀態(tài)在不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞增殖影響比較圖所示，，在同一濃度(0.lryo)下，CMCNa組對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，CMCNa與對(duì)照組相比有顯著性差別，CMCNa組對(duì)細(xì)定的抑制作用，但抑制作用并不明顯。這可能是因?yàn)镃MCNa的加
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R783

【參考文獻(xiàn)】

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1 鐘金晟;歐陽(yáng)翔英;梅芳;鄧旭亮;曹采方;;多孔β-磷酸三鈣/膠原支架與犬牙周膜細(xì)胞三維復(fù)合體的構(gòu)建[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年05期

2 孫衛(wèi)斌,吳亞菲,丁一,儲(chǔ)成林,劉天佳;納米羥基磷灰石對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖活性的影響[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2004年06期

3 毛釗;毛曦;儲(chǔ)成林;;人牙周膜細(xì)胞接種于納米-羥基磷灰石上的形態(tài)學(xué)研究[J];東南國(guó)防醫(yī)藥;2008年03期

4 黃文;劉泉;;頜骨囊腫摘除后即刻植入納米羥基磷灰石的臨床觀察[J];華夏醫(yī)學(xué);2009年01期

5 謝民;趙立新;高成山;;納米羥基磷灰石對(duì)軟化牙本質(zhì)再礦化效果實(shí)驗(yàn)研究[J];貴州醫(yī)藥;2009年01期

6 謝民;黃敏;高成山;;納米羥基磷灰石蓋髓材料臨床應(yīng)用研究[J];貴州醫(yī)藥;2009年06期

7 劉冬梅,李慕勤,馬臣;不同分散劑對(duì)納米羥基磷灰石粒子團(tuán)聚的影響[J];佳木斯大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年03期

8 馬旭東;王健平;;納米復(fù)合羥基磷灰石(nHA)根管充填材料的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[J];西南軍醫(yī);2009年03期

9 王進(jìn)濤;鐘良軍;;牙周病治療新進(jìn)展[J];口腔醫(yī)學(xué);2009年10期

10 劉冰;陳鵬;臧曉霞;李冬霞;馮巖;;活性納米羥基磷灰石復(fù)合膠原/聚乳酸材料對(duì)拔牙創(chuàng)早期愈合及牙槽嵴吸收影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];口腔醫(yī)學(xué);2010年01期

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1 李箐;氟/鉀納米羥基磷灰石涂膜的合成及其對(duì)牙本質(zhì)的作用[D];四川大學(xué);2006年

2 謝曉莉;LTA及LPS對(duì)人牙周膜細(xì)胞凋亡和炎性細(xì)胞因子的影響[D];中南大學(xué);2010年

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1 金華芳;不同分散劑對(duì)納米羥基磷灰石生物學(xué)效應(yīng)的影響[D];武漢理工大學(xué);2009年

2 唐國(guó)旗;大蒜素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞DNA合成及細(xì)胞周期影響的研究[D];中南大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2606793